stsnrk1γ和stabi1在马铃薯低温糖化中的功能研究蔬菜学专业论文.docxVIP

华中农业大学2016届硕士研究生学位论文2．2。6烟草瞬时表达和荧光成像 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文 2．2。6烟草瞬时表达和荧光成像 16 2．2．7蛋白原核表达与纯化 。l 6 2．2．9农杆菌介导的遗传转化 18 2．2．10株系生理指标测定 ．18 2．2．1 1统计分析 ．19 3结果与分析 。20 3．1马铃薯StSnRKly功能分析 ．．20 3．1．1 StSnRKIy基因克隆及生物信息学分析 ．20 3．1．2 StSnRKI?在不同低温糖化抗性材料块茎中的表达分析 ．23 3．1-3 StSnRKIT与SbSnRKla之间的互作验证 ．23 3．1．4 StSnRKIT的亚细胞定位 ，25 3．1．5 StSnRKIT基因在马铃薯块茎低温糖化过程中的作用 ．．26 3．2 SbSnRKla上游磷酸酶StABll ．．3 1 3．2．1 StABll基因克隆及生物信息学分析 ．．3 1 3．2．2 StABll基因在不同低温糖化抗性块茎中的表达分析 ．．34 3．2．3亚细胞定位 35 3．2．4原核表达与蛋白纯化 。35 3．2．5 StABll基因在马铃薯低温糖化中的作用 。37 3．2．6转基因株系加工品质分析 。40 4讨{仑 ．．42 4．1 StSnRKIy作为SnRKI的一个调节亚基来调控马铃薯低温糖化 ．．42 4．2 StABII作为SnRKl的上游磷酸酶来调控马铃薯低温糖化 ．42 4．3 StSnRKIT研究展望 ．43 4。4 S谯B11研究展望 。43 参考文献 44 致j射 ．5l Ⅱ 万方数据 StSnRKI?和StABll在马铃薯低温糖化中的功能研究摘要 StSnRKI?和StABll在马铃薯低温糖化中的功能研究 摘要 马铃薯加工品质的改善是我国目前需要解决的问题之一，而解决这一问题的关 键是抑制马铃薯低温条件下还原糖的积累。本实验室前期研究表明，马铃薯SbSnRKl 在调控马铃薯低温糖化方面具有重要作用，因为SbSnRKl可以与转化酶和转化酶抑 制子组成一个复合体对转化酶活性进行调控，而调控的关键是SbSnRKlet的磷酸化 状态。然而，马铃薯SbSnRKl的三聚体其他成员的作用及其磷酸化机制尚不明确。 基于以上问题，本研究对StSnRKl的pY亚基及其磷酸酶StABll进行了研究，主要 得到以下结果： 1．为了明确马铃薯中StSnRKI?是否存在及其在马铃薯低温糖化中的作用，首 先通过同源比对在马铃薯中克隆了StSnRKI?：此外通过酵母双杂实验，证明了其与 SbSnRKlet之间存在互作，说明StSnRKly很可能是SbSnRKl异源三聚体的一个成 员。同时构建干涉表达载体，获得了相应的转基因株系，并测定不同处理条件下转 基因株系块茎中相关生理指标。结果表明与对照相比，3个转基因干涉株系块茎还 原糖含量分别下降了33．3％、22．2％、25．9％，转化酶活性分别下降了30．7％、56．0％， 63．3％，而且油炸薯片颜色也有所改善，进一步说明了StSnRKly确实参与了马铃薯 低温糖化的调控。 2．为了研究磷酸酶StABll在马铃薯低温糖化中的作用，首先在马铃薯中克隆 了StABll，然后测定了其在不同温度处理条件下不同低温糖化抗性材料块茎中的表 达量。结果表明，低温处理后，其在低温糖化敏感材料中的表达量变化倍数比在低 温糖化抗性材料中大，说明低温条件下该基因更容易在低温糖化敏感材料中诱导表 达。同时亚细胞定位结果表明，该基因定位在细胞质中。此外构建了其干涉表达载 体并获得了相应的转基因株系，进一步测定了其转基因干涉株系块茎中还原糖和转 化酶活性，结果表明，与对照相比，低温处理后转基因株系块茎中还原糖含量下降 了55％左右，达到极显著水平，而转化酶活性下降了45％左右，油炸薯片颜色明显 改善。说明该基因确实能够通过调节转化酶活性来调控马铃薯低温糖化，进而改善 马铃薯加工品质。 关键词：马铃薯；低温糖化；SbSnRKl；StSnRKll,；StABll 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文Abstract 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文 Abstract The improvement of potato processing quality is one of the problems that need to be solved in our country，and the key is to inhibit the accumulation of potato reducing sugar． Our previous research has proved that SbSnRKI ca