β肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素引起星形胶质细胞erk磷酸化的信号传导途径药学;药理学专业论文.docxVIP

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β肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素引起星形胶质细胞erk磷酸化的信号传导途径药学;药理学专业论文

·英文缩略语·9 ·英文缩略语· 9 中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。 论文作者签名: 查兰j堑 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师 为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外),以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名: 吝争栳 指导教师签名: 日 ·中文论著摘要·13一肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素引起 ·中文论著摘要· 13一肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素引起 星形胶质细胞ERK磷酸化的信号传导途径 月IJ 吾 在脑内,肾上腺素能和去甲肾上腺素能神经元位于脑桥和延髓,分别向上和 向下投射神经纤维,其支配区域相当广泛,包括大脑皮质、边缘叶、海马和脊髓。 正常状态下,对维持脑的功能发挥重要作用。在病理状态时,去甲肾上腺素除了 与抑郁症有关外,目前研究发现在多发性硬化病人的脑白质中,星形胶质细胞出 现p.肾上腺素受体的丢失;在老年性痴呆的病人,Gs蛋白耦联受体细胞内信号传 导系统、cjUVIP和蛋白激酶A(PKA)功能降低。 神经胶质细胞可分为星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞。其中星形 胶质细胞是哺乳动物脑内分布最为广泛的一类细胞。星形胶质细胞从胞体伸出许 多长且有分支的线状伪足,并黏附在微血管周围。相邻星形胶质细胞间有缝隙连 接,缝隙连接处狭窄,只允许小分子物质通过。星形胶质细胞是不可兴奋型细胞, 具有支持、营养神经细胞,维持细胞外液离子平衡,构成血脑屏障及合成神经活 性物质的功能,同时表达多种生物活性物质的受体,并且在免疫调节中起着重要 作用。 上皮生长因子受体(EGFR)的间接激活(Transactivation)是近年来发现的 细胞内/外信号传导途径,是细胞根据外界刺激调节自身功能的一种巧妙方式。G 蛋白耦联受体(GPCR)激活或外界刺激,导致某种生长因子的释放,进而激活自 身和相邻的酪氨酸激酶受体,产生与直接激活酪氨酸激酶(RTK)相似效应的过 程。EGFR被配体激活后启动细胞内信号传导,经过细胞质中衔接蛋白、酶的级 联反应等,调控细胞迁移、黏附、增殖、分化和凋亡,并且与肿瘤的形成与恶化 密切相关。 B.肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素(Isoproteren01)对细胞的调节具有细胞 特异性。在某些细胞异丙肾上腺素能够引起上皮生长因子受体的激活,而在另一 特异性。在某些细胞异丙肾上腺素能够引起上皮生长因子受体的激活,而在另一 些细胞则抑制细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化;即使同样是p一肾上腺素受 体激活所引起的ERK磷酸化,其信号传导通路也不尽相同。本篇文章主要研究在 星形胶质细胞,(1)D.肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素是否引起EGFR的间接 激活;(2)异丙肾上腺素引起ERK磷酸化的信号传导途径。 方法 星形胶质细胞取材于新生CD.1小鼠大脑皮层。无菌操作,断头剥离脑膜后, 取出脑组织。显微镜下分离出大脑皮层,切碎后加入培养液充分振荡1分钟。分 别过100岬和70 lain滤膜,放入FalconPrimaria培养皿中。用含有7.5 mM葡萄 糖的DMEM培养基进行培养,每周更换两次新鲜培养液,培养三周后用于实验, 实验前一周加入dBcAMP促进细胞分化成熟。首先在培养皿中加入PTX、H.89、 GM6001、肝素、AGl478或PPl其中任一种抑制剂,370C孵育15分钟。再加入 异丙肾上腺素,孵育20分钟。移出培养液,应用PBS清洗细胞后,加入300“l/ 皿裂解液收集细胞。匀浆后的样品进行免疫凝胶电泳半定量测定ERKl/2磷酸化水 平。使用SPSS 12.0软件进行统计分析,多组资料用one-way ANOVA方法进行比 较,P0.05表示差异具有统计学意义。 结果当日7I弋 l、异丙肾上腺素诱导ERK的磷酸化 在星形胶质细胞,异丙肾上腺素引起ERK的磷酸化。异丙肾上腺素浓度为1 nM时

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