不同血清分型链球菌荚膜多糖的提取分离与结构组成初步分析制药工程专业论文.docxVIP

学位论文作者签名：张．鉴J、谚签字日期：山。f年∥月V日学位论文版权使用授权书 学位论文作者签名：张．鉴J、谚签字日期：山。f年∥月V日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公 众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：剃。h夕 导师签字： 芬心 签字日期：如lf年‘月≯日 签字日期：2D“年石月2曰 不同血清分型链球菌荚膜多糖 不同血清分型链球菌荚膜多糖 的提取分离与结构组成初步分析 摘 要 链球菌为兼性厌氧的革兰氏染色阳性菌，其可引起猪及人类的多种疾病。荚 膜多糖有抗吞噬活性，在猪链球菌致病过程中发挥重要作用，因此，不少学者正 努力探索预防这些疾病的途径，以荚膜多糖为基础的疫苗研制工作正在展开。本 文对l型、1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖进行提取分离，通过多种提取和分离 技术及免疫检测手段，获得了成分较为均一的具有免疫活性的各型荚膜多糖组分 Tl、Tl／2和T14，然后对各个组分糖含量、蛋白含量、唾液酸含量、单糖组成、相 对分子质量等理化性质进行分析，并采用多种化学分析及现代仪器分析技术，初 步确定了1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖化学结构。 采用不同酶解法和钙盐分步沉淀法依次对静置培养的1型、1／2型和14型猪 链球菌菌体进行提取，对提取得到的荚膜粗多糖组分CPS卜CPSl／2和CPSl4分别 进行了初步的理化性质研究。对CPS卜CPSl／2和CPSl4分别采用Q Sepharose Fast Flow离子交换层析柱和Sepharcryl S-300凝胶渗透层析柱进一步纯化，其中得到 的组分Tl、Tl／2和T14经斑点酶联免疫吸附试验(Dot．ELISA)证明分别为1型、 1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖。经测定荚膜多糖T卜Tl／2和T14相对分子质量 分别为262．5 kD、512．7 kD和487．4 kD，糖含量分别为29．3％、96．6％和53．5％， 蛋白含量分别为3．1％、4．3％和O．5％，唾液酸含量之比分别为1：2．67：0．1 9。经PMP 柱前衍生高效液相色谱法分析，Tl单糖组成摩尔数比为GaI：GIcN：Glc：Rha： GalN=I：1．46：0．79：2．13：0．27，Tl／2单糖组成摩尔数比为Gal：GlcN：GIc：Rha：GalN=1： 0．63：0．6：0．43：0．56，T14单糖组成摩尔数比为Gal：GIcN：GIc：Rha=I：O．46：0．34：0．08。 在对各型荚膜多糖组分基本理化性质进行研究的基础上，对组分Tl／2和T。4进行 红外光谱和核磁共振波谱分析，对其相应脱唾液酸后的产物DTI，2和DTl4进行核 磁共振波谱分析和气相质谱分析，通过多种化学分析方法和现代仪器分析技术对 磁共振波谱分析和气相质谱分析，通过多种化学分析方法和现代仪器分析技术对 荚膜多糖Tl，2和T14的结构进行了较为系统的研究。结果表明，Tl忍主要含有 -*3，4)Gal．(1_，Gal．(1_，_3，4)Rha-(1一，一3)Glc一(1_这四种结构单元，同时 含有少量的一2，3)Rha．(1_，一4)I让a．(1一等分支点；T14主要含有Gal．(1_， -*3，6)Gal．(1_，-÷3)Glc一(1_这三种结构单元，同时含有少量的一2，4)Rha-(1_分 支点。另外，本实验中还得到TI．1、Tl／2-B、T14．B和T14c多糖组分，并对其糖含 量、蛋白含量、唾液酸含量、单糖组成、相对分子质量等理化性质进行了研究。 目前对猪链球菌荚膜多糖的研究主要集中在血清2型上，对其它具有致病性 的1型、1／2型和14型猪链球菌的研究并不多，特别是对其分离纯化和结构分析 方面的研究报道尚不多见。本文对1型、1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖(Tl、 Tl忍和T14)及其相关无免疫原性的多糖组分(Tl-a、Tl／2-B、T14-B和T14-c)进行 了初步研究，通过对1／2型和14型猪链球菌荚膜多糖的结构进行较为系统的研 究，可以为以荚膜多糖为基础的疫苗研制提供更多的线索和依据，进而推动未来 多价疫苗和结合疫苗的发展。 关键词：猪链球菌；荚膜多糖；提取；分离；结构分析 Extraction，isolation Extraction，isolation and preliminary structural charac