产生gaba酵母菌资源多样性和分子系统学研究植物学专业论文.docxVIP

Dissertation Dissertation for Master Degree of Zhej iang Normal University Resoure Diversity and Molecular Systematics Studies on Yeasts which Produce GABA Candidate：Xu Xiaobo Supervisor：Prof．Jiang Donghua Discipline：Botany College of ChemistryLife Science， Zhejiang Normal University,Jinhua 321004，Zhejiang May,2010 This This Research was Funded by the maj or sciencI andan technologytechnology planPlan of Zhejhe lan province(2007C12036)and the Natural Science Foundation of Zhej iang Province (Grant Y306172，Y3090343)· 4 4 产生GABA酵母菌资源多样性和分子系统学研究摘要 产生GABA酵母菌资源多样性和分子系统学研究 摘要 酵母菌是我国重要的微生物资源，在我国已有两千多年的使用历史。但是 关于酵母菌的分类鉴定，特别是属以下种的分类鉴定存在很多争议和混乱，这 对于酵母菌的研究和应用是很不利的。 丫．氨基丁酸(GABA)是广泛分布于动植物中的一种天然活性成分，具有 降血压、镇痛、改善脑机能、精神安定、促进长期记忆等多种生理功能。GABA 的研究开发已经成为新的热点，通过筛选优良、高产、安全的酵母菌等微生物 菌株，发酵生产富含GABA功能性食品配料，其产品具有成本低、含量高及可 安全用于食品的优点。本研究以能产生GABA的酵母菌为研究对象，从形态学、 分子生物学等方面探索了产生Q惦A酵母菌菌种的鉴别方法，以期为酵母菌菌 种鉴别和亲缘关系研究提供借鉴。具体结果如下： 1．从各种不同水果表皮和不同场所的自然环境中分离得到256株纯的酵母菌 株，筛选得到能产GABA的酵母菌株17株，另外索要和购买了2株参照菌株。 以这19株酵母菌株为研究对象，通过传统的形态学分类鉴定方法，依据《酵母 菌的特征与鉴定手册》，将19株酵母进行初步分类鉴定，结果如下：Y-5、Y-8、 Y-9、Y-IO、Y-ll、Y-16、Y-17和Y-19为啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)： Y-6、Y-13为红酵母(Rhodotorula gtutinis)；Y-14和Y-18为红冬孢酵母 (Rhodosporidium toruloides)：Y-2、Y4和Y-7为乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)I Y-3和V15为葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)；Y-12为地生酵母 (Saccharomyces telluris)。 2．从27条ISSR引物中筛选得到lO条引物，共扩增出108条谱带，其中90．7 ％呈多态性。以ISSR．PCR扩增的产物图谱为依据，对供试的19个酵母菌株进 行聚类分析。在相似水平为0．69处，19个酵母菌株可以划分为5个群，第1群： 摘要Y-1，V3，V5，Y-10，Y-19，Y-8，Y-16，Y-17，Y-9，Y-11；第1I群：Y-2，Y-4， 摘要 Y-1，V3，V5，Y-10，Y-19，Y-8，Y-16，Y-17，Y-9，Y-11；第1I群：Y-2，Y-4， V7；第Ⅲ群：Y-6，Y-13，Y-18，V14；Y-15和Y-12酵母分别代表一个群。 3．从88对SRAP引物中筛选得到了14对引物用于实验。总共扩增出279条 谱带，其中92．5％呈多态性，每对引物平均扩增出20条谱带。根据SRAP—PCR 的扩增图谱，对供试的19个酵母菌株进行聚类分析。在相似水平为7l％处时， 供试的19株酵母菌株被划分为四个类群，第1群：Y-6，Y-18，Y-14，Y．7，Y-2， Y-4；第1I群：Y-12；第1II群：Y-3，Y-11，Y-16，Y-5，Y-8，Y-13，Y-17，Y-1， V19，Y-10，Y-9：第Ⅳ群：Y-15。 4．对供试的19株酵母菌株的5．8S rDNA-ITS区域进行PCR扩增，对未纯化 的PCR产物进行ITS区域的测序，通过Blast比对，对供试的19株酵母菌株进 行鉴定：Y-1，Y．3，Y-5，Y-8，Y-9，Y-10，Y-11，Y-16，Y-17，Y-19为啤酒酵 母(Saccharomyces cerevis