江南卷柏脱氢抗坏血酸还原酶分子特性.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, January 25; 27(1): 76−84 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2011 CJB, All rights reserved. 农业生物技术 江南卷柏脱氢抗坏血酸还原酶的分子特性 1,3 1,3 2 2 1 成子硕 ，兰婷 ，李迪 ，杨海灵 ，曾庆银 1 中国科学院植物研究所 系统与进化植物学国家重点实验室，北京 100093 2 北京林业大学生物科学与技术学院，北京 100083 3 中国科学院研究生院，北京 100049 摘 要: 脱氢抗坏血酸还原酶 (DHAR) 在植物抗坏血酸−谷胱甘肽循环中发挥着重要作用。利用同源克隆技术从江南 卷柏中克隆到 2 个脱氢抗坏血酸还原酶基因，分别命名为 SmDHAR1 和 SmDHAR2 。SmDHAR1 和 SmDHAR2 分别编码 218 和 241 个氨基酸，预测分子量分别是 23.97 kDa 和 27.33 kDa 。基因组序列分析显示这 2 个基因分别含有 5 和 6 个 内含子。器官表达模式分析发现这 2 个基因在根、茎、叶中均有表达，是组成型表达基因。在大肠杆菌中表达并纯化 了2 个基因的重组蛋白。酶活性分析显示 SmDHAR1 和 SmDHAR2 蛋白对底物 DHA 的活性有显著差异，分别是 19.76 和 0.17 μmol/(min·mg) 。热力学稳定性分析显示这 2 个重组蛋白的热力学稳定性具有明显差异。因此，基因结构与酶学 性质的差异预示着这 2 个基因可能存在功能上的分化。 关键词: 江南卷柏，脱氢抗坏血酸还原酶，克隆，蛋白表达，酶活 Molecular characterizations of two dehydroascorbate reductases from Selaginella moellendorffii 1,3 1,3 2 2 1 Zishuo Cheng , Ting Lan , Di Li , Hailing Yang , and Qingyin Zeng 1 State Key Laboratory of Systematic and Evolutionary Botany, Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100093, China 2 College of Life Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, Beijing 100083, China 3 Graduate School of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China Abstract: Plant dehydroascorbate reductase (DHAR) is a physiologically important reducing enzyme in the ascorbate-glutathione recycling reaction. In this study, two DHARs genes (SmDHAR1 and SmDHAR2) were isolated from Selaginella moellendorffii. The SmDHAR1 and SmDHAR2 genes encode two proteins of 218 and 241 amino acid residues, with a calculated molecular ma