层层组装构建基因控释超薄膜的研究材料学专业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 摘要 膜分别为6和18 nm。通过LbL技术温和的组装环境，非常方便的构建出组装有 DNA纳米微球的纳米尺度的超薄膜，并且最大程度保持了DNA微球的缔合状 态，为该种DNA微球在生物体内的传递提供了强有力的技术平台。 研究最后考察了(PLL仍NA)和(DNA微球／聚阴离子)两种类型超薄膜的 细胞转染能力。研究首先考察了具有生物酶可降解性的(PLL／DNA)超薄膜。 实验结果表明，将超薄膜酶降解，从中释放的DNA分子仍保持有原有的生物活 性，可转染细胞。研究接着考察了同样具有生物可降解性的(DNA微球／PGA) 超薄膜。实验结果表明，通过蛋白酶的降解，DNA微球可从超薄膜中释放出来， 并且该种DNA微球保持了其特有的缔合状态，可直接转染细胞，而无须加入新 的帮助转染的载体。进一步的研究表明，(DNA微球／聚阴离子)型超薄膜也可 原位转染贴壁于上的细胞。基于PSS的超薄膜表面由于可提供更高密度的DNA 微球，因此可以达到比基于PGA的超薄膜更高的原位转染率。通过将(DNA微 球／PGA)超薄膜组装在三维聚乳酸组织工程支架上，实现了细胞在组织工程支 架表面的转染。对基因超薄膜的细胞转染研究，清楚显示其作为DNA传递体系 在基因治疗领域有着切实可行的应用前景。 本论文的研究工作成功构建了具有酶敏感特性的(PLL／DNA)超薄膜和高 效负载DNA微球的(DNA微球／聚阴离子)超薄膜。两种类型的基因超薄膜可 与生物医用装置相结合，在不久的将来，该技术不但有望解决医用装置本身在生 物相容性和生物功能化方面所存在的种种不足，同时也将极大的拓展生物医用装 置在基因治疗领域中的应用。 关键词：生物医用装置，基因治疗，基因传递，静电层层自组装，DNA超薄膜。 浙江大学博士论文 浙江大学博士论文 Abstraet Abstract It is well known that gene therapy is a potential powerful tool to deal with many scvere diseases such as cancel．Therefore it has been extensively researched worldwide．Effective gene delivery is the main objective in gene therapy．Toward the goal ofconstructing novel gene delivery system，two kinds ofultrathin DNA film via electrostatic layer-by—layer(LbL)self-assembly technique have been constructed． Firstly,(DNA／poly—L一(1ysine)(PLL))ultrathin fill is constructed via LbL self-assembly technique．The PLL is chosen雒model polycation because of its biocompatibility and biodegradability．Therefore，the PLL could endow the film with special ability of cnzyme sensitivity．Both UV-vis spectrum and atomic force microscope(AFM)measurements show a typical LbL deposition of DNA and PLL．It is found that the salt concentration ofthe deposition solution has significant effect on the construction ofthe films，which might be attributed to the effect ofsalt ions on the conformation of polyelectrolytes and interaction bctween PLL and DNA molecules． Therefore,through the controlling salt concentration,the film’s thickness and adsorbed amount of polyelectrolytes could be modulated in nano—scale．The AFM measurement