《SNT1142-2002-马病毒性动脉炎微量血清中和试验操作规程》.pdfVIP

马病毒性动脉炎微量血清中和试验 操作规程 A protocol of micro-serum neutralization test for equine viral arteritis SN ／T 1 142— 2002 前 言 本标准是参考国际兽疫局的标准( 《诊断方法和疫苗标准手册》2000年，第四版)，并参考《中国进出境动物检疫规范》手册和美国国家兽医实验 室的标准程序编写、制定。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国青岛出入境检验检疫局。 本标准起草人：梁成珠、朱来华、徐彪、吴华。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 范围 本标准规定了马病毒性动脉炎微量血清中和试验方法。 本标准适用于马病毒性动脉炎中和抗体水平的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用 于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 国际兽疫局《诊断方法和疫苗标准手册》2000年，第四版 3 仪器设备 3.1 超净工作台或生物安全柜。 3.2 二氧化碳培养箱。 3.3 倒置显微镜。 3.4 液氮贮存罐。 μ 3.5 蔡氏滤器和微孔滤膜(0.22 m)。 3.6 蒸汽消毒器。 3.7 微量细胞培养板(96孔)。 3.8 微型振荡器。 μ 3.9 可调微量移液器和吸嘴(200 L)。 3.10 电子天平(0.1 mg～200 g)。 3.11 吸管(1 mL、2 mL、5 mL、10 mL)。 4 试剂 4.1 抗生素贮存液 μ 用灭菌双蒸水配成每毫升含10 000 IU青霉素和10 mg链霉素的贮存液，用微孔滤膜(0.22 m)过滤除菌，分装成2 mL ／瓶，-20℃冻存备用。保存 期不超过60 d。 4.2 7.5％碳酸氢钠溶液 μ 7.5 g碳酸氢钠(A.R.)溶解于100 mL双蒸水，用微孔滤膜(0.22 m)过滤除菌，分装成2 mL ／瓶，4℃冷藏备用。保存期不超过60d。 4.3 细胞消化液(0.02％EDTA) EDTA(乙二胺四乙酸二钠：Versense)(A.R.) 0.2 g 氯化钠(A.R.) 8.O g 氯化钾(A.R.) 0.2 g 磷酸氢二钠(A．R．) 1.15 g 磷酸二氢钠(A．R．) 0.2 g 加双蒸水至1 000 mL，充分溶解，分装成小瓶，115℃高压灭菌10 min，4℃冷藏备用。保存期不超过90 d。 4.4 病毒株和细胞系 -196℃(液氮)冻存备用。 4.4.1 马病毒性动脉炎病毒(Equine Arteritis Virus，EAV)(Bucyrus