《SNT1166.1-2002-水泡性口炎补体结合试验操作规程》.pdfVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1166.1-2002 水泡性口炎补体结合试验操作规程 Protocolofcomplementfixationtestforvesicularstomatitis 2002一11一25发布 2003一05一01实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 SN/T 1166.1-2002 HIJ 舀 水泡性口炎(VesicularStomatitis,VS)补体结合试验在参考国际兽疫局(OIE)((哺乳动物、禽和蜜 蜂A和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》和实践经验的基础上制定。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国云南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:花群义、周晓黎、徐自忠。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准 SN/T 1166.1-2002 水泡性口炎补体结合试验操作规程 范围 本标准规定了水泡性口炎补体结合试验方法。 本标准适用于动物水泡性口炎病毒抗原检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过在标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方 研 究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO3696:1987) 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 3.1 CF:补体结合试验。 3.2 CH;-50%补体溶血单位。 3 3 VSV:水泡性口炎病毒。 3.4 VSV-NJ:水泡性口炎病毒新泽西型;VSV-IND水泡性口炎病毒印地安那型。 3 5 VBD:巴比妥缓冲液。 3 6 PBS:磷酸盐缓冲液。 4 原理 补体结合试验包括两个系统，第一系统为反应系统，即已知抗原(或抗体)，被检血清(或抗原)和 补体。第二系统为指示系统(亦称溶血系统)，即溶血素加绵羊红细胞，溶血素即抗绵羊红细胞抗体。补 体常用豚鼠血清，它对红细胞具有较强的裂解能力。补体只能与抗原一抗体复合物结合并被激活产生 溶血作用。因此，如果试验系统中的抗原和抗体是对应的，形成了免疫复合物，定量的补体就被结合， 这时加人指示系统，由于缺乏游离补体，就不产生溶血，即为阳性反应。反之试验系统中缺乏抗原或特 异性抗体，不能形成免疫复合物补体就游离于反应液中，被指示系统，即溶血素加绵羊红细胞免疫复合 物激活，发生溶血，即阴性反应。 5 试剂和材料 5.1 溶血素:由指定单位提供。也可用50%的绵羊红细胞连续免疫家兔而获得兔抗绵羊红细胞血清， 即溶血素。 5.2 补体:由指定单位提供。也可采集健康的公豚鼠血清,2只~3只豚鼠血清混合，分装成每小管 1mL，置于一25℃以下低温冻结保存使用。 5.3 2.8%绵羊红细胞悬液的制备:可直接购买保存于阿氏液中的绵羊红细胞。也可自行采血，保存于 阿氏液中。用前用冷VBD离心洗涤三次至上清液清亮。若三次离心仍不能使上清液清亮，则应更换 新批号的红细胞。取离心沉淀的绵羊红细胞(按离心管上的刻度定即可))2.8MI，加97.2mL的VBD, SN/T 1166.1-2002 摇匀即成。 5.4 病毒;VSV-NJ和VSV-IND国际标准毒株，由指定单位提供。 5.5 标准阳性对照抗原和标准阴性抗原的制备:见附录A. 5.6 标准阳性血清:VSV-NJ和VSV-IND血清效价应达到1:16以上。由指定单位提供。 5.7 标准阴性血清:VSV-NJ和VSV-IND标准阳性血清互为阴性血清对照。由指定单位提供。 5.8 VBD稀释液 :