端粒酶和pinx1基因在食管癌中的表达及生物学意义病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 8 英文缩写 16 研究论文端粒酶和PinXl基因在食管癌中的表达及生物学意义 引言 18 第一部分端粒DNA长度及端粒酶hTERT在食管癌高发区人群中的表达 及生物学意义 前言翮舌 2020 材料与方法 21 结果 25 附图 29 附表 38 讨论 43 小结 47 参考文献 47 第二部分食管癌中的端粒酶活性和PinXl的表达及其生物学意义 前言刖舌 ．． ．． ． ．5Z52 材料与方法 53 结果 60 附图 63 附表 70 讨论 74 小结 77 参考文献 78 第三部分基因转染PinXl对食管癌Eeal09细胞增殖和凋亡以及端粒酶 活性的影响 前言日lJ舌 ． ．．18—1 材料与方法 8l 结果 96 附图 附图 一99 附表 ．107 讨论 。1 10 小结 ．．1 1 1 参考文献 ．． 112 结论 ．．1 14 综述端粒、端粒酶和PinXl与肿瘤的关系 ．．1 15 致谢 128 个人简历 ．j ．．129 中文摘要端粒酶和PinXl基因在食管癌中的表达及生物学意义 中文摘要 端粒酶和PinXl基因在食管癌中的表达及生物学意义 摘 要 目的：食管癌(esophageal carcinoma，EC)是全世界最常见的消化道恶 性肿瘤之一，我国的食管癌发病率较高，河北省磁县更是食管癌的高发区。 严重影响着人们的生活质量和生命健康。端粒、端粒酶在肿瘤细胞的永生 化和演进中扮演重要角色。端粒酶的激活可以导致细胞无限制地增殖和肿 瘤的发生。端粒(telomere)作为分子钟控制着人类细胞的复制与衰老，与 细胞的寿命密切相关。正常细胞每次分裂，端粒DNA长度会缩短55-200 bp，经历多次分裂后缩短至其下限时，细胞最终凋亡或死亡。端粒酶 (telomerase)是一种以自身RNA为模板的逆转录酶，其核心组分之一端 粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)是端粒酶 发挥活化作用的重要途径，它的表达调控在端粒酶活性调节中起关键作 用，是细胞呈现端粒酶活性的决定因素。已有大量研究发现，在恶性肿瘤 的发生中存在有端粒DNA长度的缩短，并且端粒酶的激活维持了大多数 组织的端粒长度，抵消了细胞分裂导致的端粒DNA消耗。说明端粒缩短 在恶性肿瘤的演变中起重要作用。已有大量研究表明，人体正常细胞除少 量细胞如精原细胞、胚胎细胞、干细胞外，大多数细胞的端粒酶几乎都是 无活性的，而与之相反在绝大多数恶性肿瘤中端粒酶活性高表达，表达率 高达90％以上。因此端粒酶的活化可能是恶性肿瘤发生发展的多种基因改 变中起到了至关重要的作用，并且可以作为最具普遍性和特异性的肿瘤分 子标记物，在肿瘤的诊断和治疗中具有重要的地位。而抑制端粒酶的活性， 将有可能阻止肿瘤细胞恶性增殖，这种特性使端粒酶成为当今肿瘤诊治研 究的热点。 本实验利用了多项实验方法检测端粒DNA长度、端粒酶hTERT蛋 白含量及细胞内DNA含量在食管癌高发区现场人食管癌、异型增生及正 常食管的表达，探讨与食管癌发生及生物学行为的关系，试图为食管癌的 早期诊断提供客观参考指标，并为揭示食管癌的发生、发展的机制提供理 论依据。采用端粒重复序列扩增反应(TRAP)-ELISA和TRAP．银染法半定 量技术，检测食管癌及异型增生组织中端粒酶活性的表达，探讨端粒酶活 中文摘要性与食管癌发生发展及其与临床病理因素的关系。 中文摘要 性与食管癌发生发展及其与临床病理因素的关系。 PinXl基因作为端粒酶的内源性抑制基因，近年来被认为是一种潜在 的抑癌基因，其表达可能与多种肿瘤的发生发展有关。有实验证实在胃癌、 大肠癌及白血病患者中PinXl表达明显下降，端粒酶活性增强。但是也有 研究显示PinXl在肝癌细胞中的表达与正常组织无显著差异，而与之相应 的是此类肿瘤中大部分端粒酶活性也增强。目前PinXl基因在肿瘤细胞中 的作用和对端粒酶活性的调控及在细胞癌变中的机制尚不十分清楚。有关 PinXl基因在食管癌中的研究国内外也鲜有报道。PinXl基因的作用越来 越引起人们的重视，但到目前为止，PinXl基因在食管癌中生物学意义、 作用机理国内外的报道很少，并且没有适合研究PinXl基因的食管癌细胞 模型。由于基因转染已经成为治疗肿瘤等基因表达异常的有效手段，那么， 通过外源性过表达PinXl基因能否抑制食管癌细胞的增殖?是否可以抑制 端粒酶活性?本实验中利用多项技术，应用细胞模型研究PinXl在人食管 癌、异型增生组织及正常食管组织中的表达，探讨PinXl与食管癌发生发 展及与食管癌临床分期、病理分型及预后的相关性，并分析与端粒酶活性 表达的相关性。研究转染PinXl基因前后细胞增殖凋亡等的变化，初