核酸分子杂交技术101108.pptVIP

核酸分子杂交技术;目 录;3;分子杂交;概念：用同位素或其他化学方法标记的与待测靶核 苷酸序列互补杂交的核酸片段（DNA/RNA ）。 用途：检测待检核酸样品中的特定基因序列。 (DNA-DNA; DNA-RNA; RNA-RNA);2．随机引物法 (random priming) ;随机引物标记法示意图 ;3．DNA探针的末端标记  Klenow大片段的末端标记法;DNA半抗原标记探针的检测;第三节 核酸分子杂交技术;---DNA检测;Paper Towels; ;β-1，4糖基转移酶在损伤坐骨神经中的表达;三、基因表达产物的检测Western印迹法;18;原位杂交;基本步骤:;What is FISH?;一、FISH:一种利用荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术;**荧光原位杂交的特点：1）快速；2）信号强；3）特异性高；4）多色；5）可以检测复杂的染色体异常：转位、缺失、微小缺失。 **FISH有上述优点的原因： 使用了荧光标记与检测系统取代放射性标记与检测系统 ;基本原理;二、FISH检测标本;三、用于FISH的探针种类;用于FISH的探针1）单一序列探针：基因座特异探针 来源：Cosmid，Plasmid， cDNA片段 应用 （a）定位DNA片段及嵌合体克隆验证； （b）确定染色体微小缺失与重复； （c）染色体断裂点分析。 （d）间期细胞染色体数目异常诊断。;DNA片段的染色体定位;21q22.2 在Down综合征间期细胞中的杂交信号;２）简单重复序列探针(simple repetitive probes) 其靶序列为α卫星DNA或卫星III DNA(alpha satellite/satellite III DNA)多位于染色体的着丝粒，重复数百次至数千次。 特点：信号强应用：(a)标记染色体识别(着丝粒探针） (b)染色体数目异常检测 (c)间期细胞遗传学研究和临床诊断;端粒重复探针用于检测数目异常（非染色体特异）;着丝粒探针用于检测非整倍体（染色体特异）;３）染色体涂染探针(chromosome painting probes) 整条染色体探针或染色体区带特异性探针，来源于一条染色体DNA文库，识别一条特定染色体全长的单一序列。 检测中期细胞染色体。应用：（1）染色体数目和结构异常分???； （2）白血病及其它肿瘤的染色体诊断和研究。;34;FISH技术的应用;CML诊断：t(9,22)(q34;q11);主要内容