蒽环类抗肿瘤药物致髓系白血病细胞耐药机制及应对策略的基础和临床研究内科学血液病专业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文时开始都升高。不同浓度阿霉素对K562细胞hTERT基因表达的影响没有差别。 浙江大学博士学位论文 时开始都升高。不同浓度阿霉素对K562细胞hTERT基因表达的影响没有差别。 0．05mg／L阿霉素作用于K562细胞的第4．5天，细胞的存活率达到最低。继续进 行细胞培养，第9天细胞存活率开始升高。第31天，细胞的存活率超过80％。 第12小时，细胞MDRl基因表达开始升高，第40天时超过14000倍。第32天 Pgp蛋白表达开始增加，第38天Pgp的表达达到K562／A02细胞的水平。结论： 阿霉素可阻滞K562细胞于G2／M期，抑制K562细胞的凋亡，上调K562细胞的端 粒酶活性。阿霉素可诱发K562细胞的MDRl基因和PgP蛋白表达增加，但不同步。 第二部分高三尖杉酯碱联合阿霉素对K562细胞的作用特点及机制的研究 目的：通过观察高三尖杉酯碱与阿霉素联合作用下K562细胞在细胞周期，细胞 凋亡及端粒酶活性等方面变化的特点，来进一步明确阿霉素对K562细胞的作用机 制；同时也通过观察两药联合作用于K562细胞时的作用特点，为临床两药的联合 应用提供实验依据。方法：流式细胞仪检测细胞周期，PgP蛋白及细胞凋亡； TRAP-ELISA法检测端粒酶活性；实时荧光定量RT—PCR检测MDRl基因。结果：10腿／1 的高三尖杉酯碱及lOng／1的高三尖杉酯碱分别与0．Olmg／1，0．03mg／1，0．05mg／1 阿霉素联合作用于K562细胞，在作用的第36d,时K562细胞的存活率均一过性的 升高。第36d,时后K562细胞均表现出剂量和时间依赖性的增殖抑制作用。10腿／1 高三尖杉酯碱对K562细胞的增殖抑制作用介于0．Olmg／1和0．03mg／1阿霉素的 作用之间。0．05mg／1的阿霉素联合lOng／1的高三尖杉酯碱作用于K562细胞，对细 胞的作用相当于0．1mg／1的阿霉素。lOng／1的高三尖杉酯碱单独作用于K562细胞 时，G2／M期细胞比例仅仅在第36d,时时出现了4．79％的增加。第36d,时，0．03mg／1 和0．05mg／l阿霉素与lOPg／1的高三尖杉酯碱联合作用于K562细胞时G2／M期细胞 比例增加，但与0．03mg／l和0．05mg／1阿霉素单药对K562细胞周期的影响相比，联 合用药时G2／M期细胞比例增加的幅度明显减小。lOPg／1高三尖杉酯碱单独作用于 K562细胞，细胞的凋亡率从第24dx时的24．68％降为第36d时的0％，第60d,时及第 11天凋亡率又升高。lOng／1高三尖杉酯碱分别联合各个浓度的阿霉素作用于K562 细胞时，第36d,时细胞凋亡率均为0％，第24d,时细胞凋亡率较阿霉素单药为高。 10pg／1高三尖杉酯碱单药及联合阿霉素除第36d,时外都下调K562细胞的端粒酶 2 浙江大学博上学位论文活性。联用高三尖杉酯碱使所有浓度的阿霉素作用的K562细胞端粒酶活性开始升 浙江大学博上学位论文 活性。联用高三尖杉酯碱使所有浓度的阿霉素作用的K562细胞端粒酶活性开始升 高的时间从第24d时提前至第124时。lOng／1高三尖杉酯碱作用于K562细胞首先 表现为细胞增殖的抑制，在第5．5天达到抑制的最低点，第11天高三尖杉酯碱对 细胞的抑制率降低为30％左右并维持这一水平。第864,时开始出现MDRl基因表达 的增加，第48天达至U120倍左右，第19天Pgp蛋白表达开始增加，第48天时Pgp蛋 白接近30％。结论：高三尖杉酯碱可部分抑制阿霉素对K562细胞的G2朋期阻滞， 减轻阿霉素引起的凋亡抑制，但对第364时细胞的零凋亡率没有影响，可下调阿 霉素引起升高的端粒酶活性。高三尖杉酯碱也可诱发K562细胞MDRl基因和Pgp蛋 白表达增加，也不同步。 第三部分高三尖杉酯碱联合阿克拉霉素及阿糖胞苷对初发成人急性髓系白血病 临床疗效 目的：观察HAA方案治疗初发急性髓系白血病的疗效及毒副作用。方法：诱导缓 解方案由高三尖杉酯碱，阿克拉霉素和阿糖胞苷三药联合组成，简称HAA方案。 高三尖杉酯碱4 mg／m2／天，每天分两次每次2 mg／m2肌肉注射或静脉滴注4小时 每天1次，共3天(第1天至第3天)；阿克拉霉素12 mg／m2／天，静脉滴注2 小时，每天一次，共7天(第l天至第7天)；阿糖胞苷150mg／m2／天，每天分两 次每次75 mg／m2皮下注射，共7天(第1天至第7天)。在病人获得完全缓解后 的第2-4周给予同样剂量的HAA方案一个疗程作为巩固治疗。维持治疗时间为3 年。总存活率(oS)和无复发存活率(RFS)采用Kaplan—Meier方法。结果： 诱导缓解的第一个疗程HAA方案完全缓解率为79％(38／48)，部分缓解率为6％ (3／48