核酸理化性质 四川理工学院.pptVIP

4.4 核酸和核苷酸的性质 (Section 4 Properties of Nucleic acid and Nucleotide) 一、溶解性（Solubility） ① RNA、Nt、Ns和Base纯品为白色粉末或结晶体。 ② DNA为纤维状固体。 ③ 核酸为极性物质，核苷酸和核苷可溶于水。 ④ 核酸大多与蛋白质结合成和蛋白。在不同的盐浓度下，DNA蛋白（DNP）和RNA蛋白（RNP）溶解度不同。 ; 核蛋白 + 1mol/L NaCI→ DNP溶解 + RNP ↓ 核蛋白 + 0.14 1mol/L NaCI → DNP ↓ + RNP溶解 (低盐DNP不溶，高盐RNP不溶) 核蛋白 在pH4.2（pH = pI）时，DNP ↓，RNP溶解 核蛋白 在pH2～2.5 （pH = pI）时， RNP ↓ ，DNP溶解 二、核酸及其组分的两性性质 1. 碱基解离，第一位都在N上, 解离位点： A：在N1解离， G：在N7解离， U：在N3解离， T：在N3解离， C：在N3解离，;2. 核苷（Ns）解离 糖的存在使N解离pK值降低，而糖上－OH的解离无足轻重（pK 在12 以上） 3. 核苷酸（Nt）解离 Pi有两次解离，pK′＝0.7～1.6 pK′＝6.1～6.5 Nt含碱基和Pi，为两性电解质，当正、负解离速度相等时，该pH即为pI，（U、T除外,不带电荷） pI = (pK′+ pK′) / 2，pK′为Pi第一解离，pK′为 N解离 eg. AMP pI = (0.9+3.8) / 2 = 2.35 了解Nt的解离及pI ，在制备及分析中极有帮助。;2. 核苷（Ns）解离 糖的存在使N解离pK值降低，而糖上－OH的解离无足轻重（pK 在12 以上） 3. 核苷酸（Nt）解离 Pi有两次解离，pK′＝0.7～1.6 pK′＝6.1～6.5 Nt含碱基和Pi，为两性电解质，当正、负解离速度相等时，该pH即为pI，（U、T除外,不带电荷） pI = (pK′+ pK′) / 2，pK′为Pi第一解离，pK′为 N解离 eg. AMP pI = (0.9+3.8) / 2 = 2.35 了解Nt的解离及pI ，在制备及分析中极有帮助。; 4、核酸分子的解离（Dissociation） 核酸和多核苷酸链除了末端磷酸残基外，磷酸二酯键中磷酸残基只有一个解离常数， pK1 =1.5 三、紫外吸收(260nm，定性和定量分析) 但分子量差异大，纯质不一，难以用NA重量浓度来表示其消光系数，故常用摩尔磷消光系数. ε(p)—每升溶液中含1mol 磷的核酸溶液（pH=7）的消光系数。 260nm: DNA=7,000～10,000 RNA=6,000～8,000;四、核酸的变性与复性（Denaturation and renaturation of NA） （一） Denaturation of NA ① 定义: NA受热、酸碱、有机溶剂、辐射、及尿素等变性剂作用，皆引起变性，所谓变性：氢键断裂，双螺旋结构解开，从而引起紫外｛ε(p) ｝增加（hyperchromie effect ，增色效应）、失去生物活性、粘度下降（双股－无规线团）（与pr反）、比旋下降 等性质改变的过程叫变性。(与降解不同，无共键的断裂) ;DNA的变性(denaturation);增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。; ;;当DNA的稀盐溶液加热到80-100℃时，双螺旋结构即发生解体，两条链彼此分开，形成无规线团。; （1）变性后理化性质改变 DNA溶液的粘度降低 浮力密度增加 旋光偏振光改变 紫外吸收增加（高色效应） 高色效应（hyperochromic effect）：DNA变性后，在260nm处的紫外吸收增高，称为高色效应或增色效应。 ;（3）融解温度（melting temperature,Tm）：DNA热变性过程中，紫外吸收达到最大值的一半时溶液的温度称为融解温度（Tm）; ;;在DNA变性后的复性过程中，如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件（温