泛素特异性蛋白酶19促进tbk1的降解负向调控细胞抗病毒免疫反应免疫学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 泛素特异性蛋白酶19促进TBKl降解负向调控细胞抗病毒免 疫反应 浙江大学医学院 免疫学 硕士研究生： 于 娟 导师： 陈玮琳 中文摘要 固有免疫系统可以识别病原微生物和组织损伤，引起免疫细胞分泌细胞因子 来保护机体免受伤害。病毒RNA，细胞质DNA和细菌的细胞壁成分脂多糖通过 模式识别受体(pattem recognition receptor,PRR)一受体蛋白对被宿主识别，这些蛋 白信号分子包括RIG—I瑚Avs，cGAS—STING和TLR3／4．TRIF等。这些信号分子活 化后均可诱导I型干扰素的产生。受体蛋白MAVS，STlNG和TRIF通过活化下游 蛋白激酶TBKl，促进转录因子IRF3(Interferon regulatory filctor 3)的磷酸化，进 而诱导I型干扰素的产生。 泛素特异性蛋白酶19(ubiquitin—specific protease 19，USPl9)是去泛素化家族一员。 尽管该分子具有一个跨膜结构域，但内源性USPl9在细胞内主要定位在胞质，并 且跨膜结构域与催化结构域相互作用引起催化活性的自我抑制。USPl9可以通过 稳定KPCI(Kipl ubiquitination-promoting complex 1，KPCI)一细胞周期蛋白依 赖的激酶抑制剂p27 Kipl的泛素连接酶，进而抑制细胞增殖。在骨骼肌萎缩和低氧 的条件下都发现细胞中USPl9的上调表达，并且在二者中发挥重要作用。研究证 实USPl9可以参与调节内质网相关的降解(endoplasmic—reticulum—associated degradation．ERAD)。而USPt9在抗感染天然免疫应答中的作用未见报道。 我们的研究发现在USPl9可以负向调控VSV病毒感染诱导的IFN-p产生。 通过双荧光素酶报告基因筛选得到USPl9可以负向调控IFN—p和ISRE报告基因 II 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 的表达，通过免疫共沉淀和双荧光素酶报告基因实验明确USPl9作用于TBKl负 向调控IFN．B的产生。在Hela细胞中将USPl9干扰后用VSV，以及在THP一1细 胞中干扰USPl9后用VSV、poly(I：C)和LPS刺激，相比于对照组都可以看到IFN．B mRNA水平促进TBKl的降解，随着VSV病毒刺激的时间延长，内源性USPl9 与TBKl的结合作用增强， USPl9作用于TBKl的机制可能是通过溶酶体途径， 但具体作用机制还在进一步研究中。综上所述，USPl9在抗病毒免疫反应中发挥 负向调控作用，对于抗病毒药物的研制提供一个新的可能靶点。 关键词：泛素特异性蛋白酶19；TBKl；干扰素调节因子3；固有免疫 III 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 ABSTRACT The ubiquitin-specific protease 19 negatively regulates cellular antiviral immune response by promoting TBKl degradation College of Medicine，Zhej iang University Immunology Candidate： Juan Yu S upervisor： Weilin Chen Abstract The innate immune system Call identify the pathogenic microorganisms and tissue damage through producing cytokines for host defense．Immune cells recognize virus RNA，Cytoplasmic DNA and bacterial cell wall components lipopolysaccharide by pattern recognition receptors(pattern recognition receptor，PRa)一receptor proteins pairs，including RIG—I—MAVS，cGAS—STING and TLR3／4一TRIF．These signal molecules can cause ty