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甜叶菊中甜菊苷与瑞鲍迪苷A含量测定方法研究 　　摘要 采用反相高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A含量，研究测定方法的精密度、线性关系、重复性、稳定性、准确度。研究结果显示，甜菊苷和瑞鲍迪苷A在～ mg/mL范围内与峰面积呈较好的线性相关关系；甜菊苷和瑞鲍迪苷A的加样回收率分别为%和%，RSD分别为%和%。本?y定方法快速灵敏、准确可靠，可用于甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A的质量控制。　　关键词 甜叶菊；甜菊苷；瑞鲍迪苷A；高效液相色谱法　　中图分类号 ；+2 文献标识码 A 文章编号 1007--0250-01　　甜叶菊又名甜菊、甜草，是菊科多年生草本野生植物。甜叶菊含有甜叶菊糖苷，其成分有4种：A苷、A3苷、C苷、D-R苷，其中A苷和A3苷为主要成分。甜叶菊糖苷具有低热量、高甜度、无毒、无副作用等特点，是一种天然甜味剂。此外，甜叶菊糖苷还具有一定的药理作用，对糖尿病、冠心病、高血压、小儿龋齿、肥胖症等病症有很好疗效[1-2]。本研究采用高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A含量，为更好地控制甜叶菊质量提供了参考依据。　　1 材料与方法　　 仪器与试剂　　 试验仪器。试验仪器有SPD-20A高效液相色谱仪、电子天平、电子天平。试验材料为甜叶菊，产自安徽省阜阳市。试验试剂有甜菊苷和瑞鲍迪苷A对照品、磷酸、乙腈。　　 色谱条件。色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-%磷酸溶液，流速为 mL/min，柱温为40 ℃，检测波长为210 nm，进样量为10 μL[3-4]。　　 对照品溶液的制备。准确称取甜菊苷对照品 mg和瑞鲍迪苷A对照品 mg，将其分别置于10 mL容量瓶中，加水使样品完全溶解并定容至刻度，摇匀。制备甜菊苷对照品溶液和瑞鲍迪苷A对照品溶液的浓度分别为、 mg/mL。　　 供试品溶液的制备。甜叶菊样品粉碎后，称取 6 g于100 mL圆底烧瓶中，加水50 mL，微沸中回流2 h，放置室温后离心，取上清液用水定容、摇匀，经 μL的滤膜过滤后可得甜叶菊溶液。　　 研究方法　　 精密度试验。分别吸取甜菊苷和瑞鲍迪苷A对照品溶液各10 μL，重复进样5次，测定对照品峰面积[5]。　　 线性关系考察。准确称取甜菊苷对照品 mg置于25 mL容量瓶中，加水使其完全溶解并定容至刻度，摇匀，所得甜菊苷对照品溶液的浓度为 3 mg/mL，作为储备液。分别准确量取储备液、、、、、 mL于10 mL容量瓶中，加水并定容至刻度，摇匀，所得浓度分别为 1、 2、 4、 6、 8、 0 mg/mL。使用同样的方法准确称取瑞鲍迪苷A对照品 mg，制得浓度分别为 5、 0、 0、 0、 0、 0 g/mL。再分别吸取上述溶液10 μL进样，测定峰面积，逐一记录数据。　　 重复性试验。取同一甜叶菊样品6份，按上述方法制备6份供试品溶液，测定峰面积。　　 稳定性试验。准确吸取同一供试品溶液10 μL，分别在0：00、4：00、8：00、12：00、18：00、24：00进样，测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A峰面积。　　 准确度试验。准确称取同一甜叶菊样品6份，每份约 g，加入适量的甜菊苷和瑞鲍迪苷A对照品，加水50 mL，微沸中回流2 h，放置室温后离心，取上清液用水定容、摇匀，经 μL的滤膜过滤后可得甜叶菊溶液。分别进样分析，计算回收率[6]。　　2 结果与分析　　由精密度试验可知甜菊苷和瑞鲍迪苷A对照品峰面积RSD分别为%和%，表明仪器精密度良好。　　线性关系考察试验中，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，甜菊苷和瑞鲍迪苷A的进样浓度与峰面积的相关系数r分别为 6和 8。表明甜菊苷和瑞鲍迪苷A浓度含量在～ mg/mL范围内与峰面积呈较好的线性关系。　　由重复性试验可知，甜菊苷和瑞鲍迪苷A的峰面积RSD均%，表明该方法重复性较好。　　由稳定性试验可知，甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A峰面积RSD分别为%和%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。　　准确度试验结果如表1所示。甜菊苷的平均回收率为%，RSD为%；瑞鲍迪苷A的平均回收率为%，RSD为%，说明该方法可行。　　3 结论　　本试验所测甜菊苷和瑞鲍迪苷A的最大吸收波长在 210 nm处。试验发现用乙腈-水作为流动相时，甜菊苷和瑞鲍迪苷A不能分离。用%磷酸溶液代替纯水，乙腈与 %磷酸溶液体积比为30∶70，能使甜菊苷和瑞鲍迪苷A较好分离。本研究采用反向高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A的含量，试验的精密度、线性关系、重复性、稳定性、准确度均表现良好，为更加好地控制甜叶菊质量提供了参考依据。　　4