蓝粒小麦4Ag染色体的显微分离与鉴定Microdissectionand.pdfVIP

农业生物技术学报，  年， 第  卷， 第  期， 第  页  2010 18 6 1031~1037 JournalofAgriculturalBiotechnology,2010,Vol.18,No.6, 1031~1037  研究论文  AnArticle  蓝粒小麦 4Ag 染色体的显微分离与鉴定 ，  1 2  2  2  1  1*  2*  任亮  郑琪  李滨  尚勋武  王化俊  李振声  1 730070 2 甘肃农业大学农学院， 甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室， 兰州  ； 中国科学院遗传与发育生物学研究所， 植物细胞与染色 体工程国家重点实验室， 北京 100101  * whuajun@ zsli@  通讯作者，  曰 摘 要 本研究采用显微分离技术从蓝粒小麦  Triticum aes tivum ( L.(2n=6x=42)伊Th inopyrum p ontic um Liu  Wang(2n=10x=70))根尖细胞中期分裂相中分离出具有 4Ag染色体形态特征的单条染色体， 对分离后的细胞 进行原位杂交(FISH)， 结果显示细胞中所剩的和显微分离到的单条染色体均为 4Ag染色体。利用 Sau3A 接 头介导的 PCR 方法对分离出的单条 4Ag染色体进行体外扩增， 扩增的 DNA 片段大小约为 200~2 000bp， 主 要集中在  之间。以  标记的蓝粒基因组  为探针 与该扩增产物进行  杂 250~750 bp  DIG­dUTP  DNA  ,  Southern  交， 结果表明显微分离出的染色体得到了有效的扩增。 利用该分离染色体的 PCR 扩增产物为探针， 对蓝粒小 麦进行原位杂交， 证明显微分离的染色体体外扩增片段确实来源于 4Ag 染色体。本研究拓宽了染色体显微 分离的范围， 为构建 4Ag 染色体文库和克隆位于该染色体上的重要农艺性状基因提供了新途径。 关键词 蓝粒小麦，  染色体， 显微分离， 原位杂交  4Ag Microdissection and Identification ofthe Chromosome 4Ag in Blue­grained  Wheat  袁 1 2  2  2  1  1*  2*  Ren Liang  ZhangQi  LiBin  ShangXunwu  WangHuajun  LiZhensheng  1 Gansu Key Labortory for Crop of Improvement and Germplasm Enhancement, College of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou  730070, China; 2 The State Key Laboratory of Plant Cell and Chromosome Engineering, Institute of Genetic and Developmental Biology, Chinese  AcademyofSciences,Beijing 100101,China  *Correspondingauthors,whuajun@;zsli@  DOI: 10.3969/j.issn.1674­7968.2010.06.