玻璃酸钠微生物限度检查的探讨.PDF

玻璃酸钠微生物限度检查的探讨 江腊梅 吴鹰 郭风仙 [1] 玻璃酸钠（sodium hyaluronate ，NaHA ）在临床应用的研究正在深入开展 。 同时，NaHA 作为化妆品的一种重要成分，应用日渐广泛。本品具有酸性黏多糖 的共有特性，为白色无定形固体，无臭无味，具强吸湿性。NaHA 疏松的、溶胀 [2] 的分子使它在水溶液中占据较大的空间，能够结合大量的水 ，使溶液具有高黏 度。这使得其在微生物限度检查中带来一些困难。 1 存在的问题 1.1 按《中国药典》2000 年版二部附录收载的方法检查，规定供试品的检验量， 对贵重的或微量包装的药品可酌减。即取NaHA 3g，加于生理盐水 100ml 中， 同时加入一定量的玻璃酸酶 （hyaluronidase ）进行处理。但经处理后的供试品溶 液还是相当黏稠，将此溶液加于平皿中，往往与培养基不能混匀，呈现供试品在 [3] 下层，培养基在上层的现象。按常规方法处理需要6~8h 方能混匀 。 1.2 在细菌计数时，常出现蔓延的片状菌落生长。其主要原因是当培养基内部的 相对水分高时，平板表面水分过多，给细菌提供游动的条件，使形成蔓延菌落的 机会增多。 2 解决的办法 为了解决上述问题，我们采取了以下方法，可得到理想的供试液，并便于细 菌计数。 2.1 取NaHA 3g，加于生理盐水140ml 中，同时加入玻璃酸酶4500 单位，置40 [3] ℃振荡器中1.0~1.5h，供试品即可呈溶液状态 ，取该溶液10ml 加于45~50 ℃的 细菌和霉菌培养基各90ml 中，充分摇匀，各分别注入6 个平皿中。待冷凝后， 将上述平板倒置于30~35℃、25~28 ℃培养箱中，分别培养48 和72h （±2h ）。 取6 个平皿生长的细菌和霉菌总数，除以2 ，乘以10，即为每 1g 供试品所 存在的菌数。 关于培养基的配制，原规定细菌培养基为取营养琼脂34g，加水至1000ml， 现改为取34g 加水900ml，或在每1000ml 培养基中多加琼脂2g 。 2.2 在细菌计数时，如出现片状菌落，可采取以下措施。 PDF created with pdfFactory trial version 2.2.1 在每 1000ml 营养琼脂培养基中，用前加入 1%TTC （2 ，3，5 一氯化三苯 四氮唑）1ml，混匀，使其最终浓度为0.001% 。TTC 具有抑制细菌作用，可使细 菌氧化而其还原显红色。所以，在添加 TTC 的培养基中多数菌落呈红色，并可 [4] 减少菌落蔓延的现象，便于计数 。 2.2.2 细菌培养时间为48h，可在每10~14h 之间查看，随时用玻璃笔在平皿底部 点出细菌数，直至48h，如有片状菌覆盖，按点计数计算。 2.2.3 在培养基中适当增加琼脂量