第一章色谱法分离原理.pptVIP

分离方法 第一章 色谱法分离原理 第一节 概述 1903年俄国植物学家茨维特在研究植物叶的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。这种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义，但仍被人们沿用至今。 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相； 自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相； 装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱。 (3)其它色谱方法 2、 按分离机理分类 吸附色谱法：利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法。 分配色谱法：利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法。 离子交换色谱法：利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法。 凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法：利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法。 亲和色谱法:利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离的技术，常用于蛋白质的分离。 3、 按固定相的外型分类 柱色谱：固定相装于柱内的色谱法 平板色谱：固定相呈平板状的色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。 色谱法的特点 优点：“三高”、“一快”、“一广” 缺点： 第二节 色谱有关术语 一、色谱流出曲线和色谱峰 当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出，由柱后检测器输出的电信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱流出曲线。曲线上突起部分就是色谱峰。 二、基线 柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值，稳定的基线应该是一条水平直线。 三、峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示。 四、保留值 1．死时间tM 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间。 2．保留时间tR 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间。它相应于样品到达柱末端的检测器所需的时间。 3．调整保留时间tR′  某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间。 即 tR′= tR - tM  由于组份在色谱柱中的保留时间tR包含了组份随流动相通过柱子所需的时间和组份在固定相中滞留所需的时间，所以tR′实际上是组份在固定相中停留的总时间。  保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一组份的保留时间常受到流动相流速的影响。 4、选择因子 式中tR2′为后出峰的调整保留时间，?总是大于1的。 五、区域宽度 色谱峰的区域宽度是组份在色谱柱中谱带扩张的函数，它反映了色谱操作条件的动力学因素。度量色谱峰区域宽度通常有三种方法：   1. 标准偏差σ  0．607倍峰高处色谱峰宽的一半。 2. 半峰宽Y1/2 峰高一半处对应的峰宽。它与标准偏差σ的关系是： Y1/2 = 2.354σ 3. 基线宽度Y 色谱峰两侧拐点上的切线在基线上的截距。它与标准偏差的关系是： Y = 4σ 六、分配系数K和分配比k 1．分配系数K 分配色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次的分配过程，而吸附色谱的分离是基于反复多次的吸附-脱附过程。 分离过程经常用样品分子在两相间的分配来描述，而描述这种分配的参数称为分配系数K。 分配系数K是指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值，即 分配系数是由组分和固定相的热力学性质决定的，它是每一个溶质的特征值，它仅与两个变量有关：固定相和温度。与两相体积、柱管的特性以及所使用的仪器无关。 2.分配