交叉韧带损伤后滑膜成纤维细胞中赖氨酰氧化酶和基质金属蛋白酶表达的分析-生物医学工程专业论文.docx

中文摘要 中文摘要 重庆大学博 重庆大学博士学位论文 I I PAGE PAGE VI 摘 要 膝关节交叉韧带损伤后愈合能力差一直是骨科临床治疗面临的难题。因此从 分子水平阐明交叉韧带难以愈合的原因至关重要。 交叉韧带受到损伤的同时滑膜也会受到不同程度损伤。动物实验发现前交叉 韧带(Anterior cruciate ligament, ACL)损伤后，与关节腔内其它组织（如：后交叉韧 带(Posterior cruciate ligament, PCL)、半月板和软骨）相比，滑膜向关节液释放了最 大量活化形式的基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases, MMPs)，因而被认为是 交叉韧带损伤后关节腔内微环境的主要调节者。为了进一步更深入的探讨滑膜的 关节腔微环境调控作用，我们体外模拟交叉韧带损伤后关节腔内微环境，在细胞 水平上研究力-化学因素刺激下，滑膜成纤维细胞中赖氨酰氧化酶 (Lysyl oxidases, LOXs)和MMPs的表达以及MMP-2活性。本文主要研究工作及结果如下： ① TNF-α和IL-1β对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMPs表达以及MMP-2活性的 影响 炎症因子被认为是炎症反应时期重要的化学调节者。研究结果显示10ng/ml TNF-α抑制了滑膜成纤维细胞中LOXs的表达。10ng/ml IL-1β上调了LOX、LOXL-1 和LOXL-3的表达，下调了LOXL-2和LOXL-4的表达。TNF-α和IL-1β分别上调了 MMP-1,2, 3的表达。TNF-α与IL-1β的结合不同程度地抑制了LOXs的表达，却以协 同方式大大促进了MMP-1,2,3的表达。明胶酶谱实验指出TNF-α和IL-1β的结合进一 步以剂量和时间依赖性形式诱导了MMP-2活性的增加，且MMP-2活性高于TNF-α 和IL-1β的单独促进作用。炎症因子刺激下，滑膜成纤维细胞中表达失衡的LOXs 和MMPs分泌进入关节液，造成关节腔中交叉韧带重塑过程的失衡，这可能是导致 受损交叉韧带无法愈合的一个重要原因。说明受损交叉韧带无法愈合不仅与其自 身因素有关，还与韧带损伤后关节腔内微环境的改变有关，其中滑膜对于关节腔 内微环境的改变起着重要的调控作用。因此在研究交叉韧带修复工作中，滑膜是 不能被忽视的。 ② 损伤性力学拉伸作用下TNF-α对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMPs表达以及 MMP-2活性的影响 在正常生理环境下，力学刺激是和关节腔内其它因子共同作用来引发损伤级 联反应的。结果显示12﹪损伤性力学拉伸抑制了LOXs（除LOXL-2）的表达，却 上调了MMP-1,2,3的表达。与10ng/ml的TNF-α相似，5ng/ml的TNF-α仍然抑制了 LOXs的表达，促进了MMP-1,2,3的表达。在5ng/mlTNF-α存在的情况下，滑膜成纤 维细胞受到损伤性力学拉伸的第1, 2, 3个小时里表现出的LOXs表达量的上调受到 抑制，之后在6h时，LOXs表达量降到对照组水平以下。相反，损伤性力学拉伸与 TNF-α以协同作用方式促进了MMP-1,2,3的表达以及MMP-2的活性。此外，体外划 痕实验显示TNF-α抑制了细胞的迁移。在力学损伤和炎症因子共同作用下，滑膜成 纤维细胞中表达失衡的LOXs和MMPs释放入滑液中引起关节腔微环境的变化，引 起受损交叉韧带细胞外基质合成与降解的失衡，不利于韧带修复。以上结果说明 除了交叉韧带自身因素外，关节腔中微环境的改变也影响着韧带的愈合能力。此 外，研究结果还指出滑膜成纤维细胞对力学因子和炎症因子非常敏感，并且在调 节关节腔微环境中起着重要作用。因此在研究交叉韧带修复工作中，滑膜是不能 被忽视的。 ③ 损伤性力学拉伸和TGF-β1对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMP-1,2,3表达以 及MMP-2活性的影响 在韧带愈合的炎症反应期，不仅炎症因子（TNF-α和IL-1β）而且生长因子（如 TGF-β1）也参与了韧带的修复。结果显示损伤性力学拉伸抑制了LOXs（除LOXL-2） 的表达 , 而TGF-β1 上调了 LOXs 的 表 达 。 损 伤性 力 学 拉 伸 和 TGF-β1 分别 上调了 MMP-1,2,3的表达。损伤性力学拉伸与TGF-β1共同作用，促进了LOXs（除LOXL-1） 和MMP-1,2,3的表达，并且MMPs的上调程度大于LOXs的上调程度。此外，损伤性 力学拉伸与TGF-β1结合，以时间依赖性方式大大促进了MMP-2的活性，明显超过 了力因子单独对MMP-2的作用。在力学损伤和生长因子共同作用下，相对于LOXs 的表达水平，滑膜成纤维细胞中更高的MMPs表达和活性破坏了交叉韧带细胞外基 质重塑过程的平衡状态，不利于韧带修复。以上结果除了说明