结核分歧杆菌外膜蛋白RV1698的结构研究-结构生物学专业论文.docxVIP

IIIIIilIIIllIllllilIIIIIIIIllIIIllIlllIIIlY1 IIIIIilIIIllIllllilIIIIIIIIllIIIllIlllIIIl Y1 81 6678 University of Science and Technology of China A dissertation for master，S degree Structu re Study of the Outer Membrane Protein Rvl 698 frOm Mycobacterium tuberculosis 中国科学技术大学学位论文原创性和授权使用声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作 中国科学技术大学学位论文原创性和授权使用声明 本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作 所取得的成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任 何他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究 所做的贡献均已在论文中作了明确的说明。 本人授权中国科学技术大学拥有学位论文的部分使用权，即：学 校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子 版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 作者签名：』嶂 2。f啤6月7日 摘要摘要 摘要 摘要 在本论文中我们解析了结核分歧杆菌外膜蛋白Rvl698的结构。Rvl698分为 三个结构域：domain 1，前30个氨基酸，可能形成一个疏水的穿膜螺旋，是Rvl698 和outer membrane结合的主要部位；domain 2，a．a．30．80，形成coiled．coil结构， 是Rvl698的二聚化结构域；domain 3，a．a．81．314，暴露在膜表面，是Rvl698 和底物结合的功能性结构域。 第一章是结核分歧杆菌外膜蛋白的背景介绍。结核分歧杆菌的外膜以分歧杆 菌酸和各种脂类为主要成分，致密，疏水性强，流动性低，厚度大，使得各种必 需的营养物质进入胞内困难，结核分歧杆菌生长速度缓慢，对干燥，酸，碱，抗 生素，化学药剂等抵抗力强。第一个分歧杆菌外膜水孔蛋白MspA结构已被解析。 MspA单体由12个反平行的beta．strand组成，八个MspA单体组成一个goblet shape的通道结构。MspA被认为是分歧杆菌外膜蛋白的模版。现在一般认为结 核分歧杆菌外膜通道蛋白是以两性亲疏水的B片组成的D桶的形式存在的。 Rv0899长期以来一直被认为是一个结核分歧杆菌的外膜通道蛋白，最近结构已 被报道，并不是一个D桶形式的通道蛋白。有功能实验证实Rvl698是结核分歧 杆菌的外膜通道蛋白，我们希望通过解析它的结构来阐明它是如何定位在外膜 上，以及通透物质的机理。 第二章介绍了Rvl698蛋白的基本信息，我们的研究方法和取得的实验成果。 Rvl698的晶体结构表明Rvl698并不是一个穿膜的beta．barrel。它的domain 2形 成coiled．coil结构；domain 3是alpha／beta混合结构域，核心部分是7个beta—strands ．形成的beta-sheet，beta-sheet的两边分布着9个alpha helix，形成一球形结构域。 Rvl69嫦邕与磷脂结合，且荧光偏振实验显示它与ATP有相互作用。 第三章介绍了运用PRE(paramagnetic relaxation enhancement)的方法 判断多结构域蛋白结构域之间结构域的定向，PRE能够提供距离顺磁中心10-23A 范围内的原子核的空间距离信息。蛋白Mpp7在溶液中的结构可能与X射线晶体 衍射所得的结构不一致，我们运用了PRE的方法验证了这一结果。 关键字：Rvl698，外膜蛋白，结核分歧杆菌，通道，PRE，晶体结构 L AbstractABSTRACT Abstract ABSTRACT We have solved the crystal structure of Rvl698 an outer membrane protein of Mycobacterium tuberculosis．The sequence of Rvl698 can be divided into three domains：the first 30 residues is domain l forming a transmembrane helix and docking the protein to the outer membrane of Mycobacterium tuberculosis．Residues 3 0．80