九龙江流域耐药细菌及其特定耐药基因和整合子的研究-生物学专业论文.docxVIP

囊萎夫学硕士学位论文 囊萎夫学 硕士学位论文 九龙江流域耐药细菌及其特定耐药基因和整合子 的研究 Studies on Antibiotic．resistant Bacteria Isolated from Jiulong River and Their Carrying Resistant Genes and Integrons 论文答辩日期： 2Q里§生鱼旦里三日 万方数据 IUll IUll Irrll II I Ill IIIII II II Y281 7777 学术诚信声明 兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取 得的研究成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果。本人依法享有和承担由此 论文产生的权利和责任。 声明人(签名)： 时间：酽匹， 保护知识产权声明 本人完全了解集美大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意集美大学可以 用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 作者(签名)： 导师(签名)： 时间：沙‘5． 6．∽ 万方数据 九龙江流域耐药细菌及其特定耐药基因和整合子的研究摘 九龙江流域耐药细菌及其特定耐药基因和整合子的研究 摘 要 自发现并开始使用抗生素后，细菌耐药性就已经产生并且随着抗生素的广泛使用而日 益严重，严重威胁着人类和动物的健康，如今细菌耐药性问题己成为全球性研究热点。 本研究从九龙江流域选取21个站点采集表面水体样品，通过抗生素筛选平板筛选出 191株无重复耐药细菌。利用16S rDNA分子鉴定以及0TU聚类分析和系统发育树确定191 株耐药细菌属于20个菌属，以不动杆菌属(25．7％)、气单胞菌属(16．2％)、丛毛单胞 菌属(14．7％)和假单胞菌属(12．0％)等菌属为主。 药敏试验结果显示该191株耐药细菌对八大类19种抗生素的耐药率为8．9％．99．5％； 所有菌株都对3种或以上抗生素有抗性；总体上看191株耐药细菌对八大类抗生素的耐药 程度为B．内酰胺类利福霉素类磺胺类氯霉素类大环内酯类四环素类氨基糖苷类喹 诺酮类。 采用PCR法检测191株耐药细菌中与上述八大类抗生素耐药性相关的23种抗性基因 的存在情况。结果显示191株耐药细菌中blarEM基因(89．0％)的检出率最高，其次是arr2／3 基因(66．5％)，再者是qnrS基因(55．0％)；全部菌株都携带至少1种耐药基因；总体 上看，191株耐药细菌中八大类耐药基因的阳性率顺序为B．内酰胺类利福霉素类喹诺酮 类磺胺及甲氧苄啶类氨基糖苷类四环素类氯霉素类大环内酯类，与耐药表型比较并 非完全对应，猜测是由于细菌有更多的耐药基因和耐药机制以及某些耐药基因表达水平低 下或表达失败等原因所导致。 此外，191株耐药细菌均检测出1型整合酶基因，5株检测出2型整合酶基因，无菌 株检测到3型整合酶基因。191株l型整合酶基因阳性菌株中有70株成功扩增出可变区， 基因盒排列共有31种，以dfrAl2—0，肛aadA2最为普遍，还包括9种新型基因盒排列： aadA5一orfD、qacH-cmlAl一aadA2、aacA4一aadAl一tnaA’、aacA4一ereAl一bZ蚴一2一aadAl、dfrA5一 aacA4一nitl—nit2一catB3、dfrAl 7-aacA4一nitl—nit2一catB3、unknown—aacA4一ereAl一blaoxA一2一dfrAl、 dUrAl6一blapsE-i—aadA2一cmlAl一aadAl、dUrAl6一blapsE4一aadA2．cmlAl一orfA’一trials4 7。而31种排列 共涉及34种基因盒，包括27种抗性基因、4种编码未知功能的假设蛋白基因、2种类似 转座酶基因和1种新型基因。其中以aadA2出现的频率最高，该基因赋予细菌对链霉素和 奇霉素的耐药性。5株2型整合酶基因阳性菌株全部扩增到可变区，基因盒排列均为 dfrA]一sat2一aadAl，其中有一株同时携带1型整合子和2型整合子。 通过本研究结果可发现，九龙江流域水环境中耐药细菌的种类多样，并且耐药细菌的 耐药程度乃至多重耐药程度亦较为严重。另外，整合子在耐药菌株中广泛出现，是导致细 菌多重耐药的重要因素之一；而新基因盒的发现预示着全球范围内的耐药菌株中还潜在很 万方数据 多未知功能的耐药基因，这对人类健康和畜牧业、水产养殖业等构成了威胁，我们应加强抗菌药物的使用管制和基因水平的耐药检测并尽快找出解决方法。 多未知功能的耐药基因，这对人类健康和畜牧业、水产养殖业等构成了威胁，我们应加强 抗