久效磷农药对虹鳟鱼性腺细胞系性激素生成途径的影响及其机制研究-生态学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 结果表明，各浓度久效磷农药对性激素合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein, StAR)的表达水平无影响，1.0 和 10.0 μg/L 久效磷农药使胆固 醇侧链裂解酶(cholesterol side chain cleavage enzyme, CYP11A1)和 17α 羟化酶 (cytochrome P45017 alpha-hydroxylase, CYP17)的表达增加，0.1、1.0 和 10.0 μg/L 久效磷农药促进了性腺芳香化酶 P450 (cytochrome P450 aromatase, CYP19A)的转 录表达，说明久效磷农药可以通过提高性激素生成相关基因的表达水平来影响性 激素的合成。 (4) 基于前一部分研究，选择影响基因表达的 10.0 μg/L 做为久效磷农药暴露 浓度，同时设置 PKA 抑制剂和 PKC 抑制剂与久效磷农药联合暴露，暴露 48 h 后，利用 real-time PCR 的方法检测 StAR、CYP11A1、CYP17 和 CYP19A 的表 达。结果表明 PKA 抑制剂与久效磷农药联合暴露组，CYP11A1、CYP17 和 CYP19A 的表达显著低于 10.0 μg/L 久效磷农药暴露组，而 PKC 抑制剂对各基因 的表达无影响，说明久效磷农药对各基因的表达调控是通过 PKA 途径进行的。 (5) 0.1、1.0、10.0、100.0 μg/L 久效磷农药暴露细胞，分别在暴露 0.5 h、2 h、 4 h、8 h、24 h 和 48 h 取样，用酶联免疫分析的方法检测细胞内 cAMP 浓度随暴 露时间和暴露浓度的变化，结果表明除 1.0 μg/L，其它浓度久效磷农药在暴露后 4 h 内均使 cAMP 浓度上升；用非放射性检测系统检测久效磷农药暴露 4 h 后 PKA 活性的变化，发现 1.0、10.0 和 100.0 μg/L 久效磷农药使细胞内 PKA 活性增强， 证明久效磷农药对 cAMP/PKA 途径具有促进作用。 综上所述，本文从性激素含量、调控性激素合成的关键酶基因表达水平和调 控基因表达的信号途径三个层次，研究了久效磷农药对性激素生成途径的干扰作 用与机制，结果表明久效磷农药通过对 cAMP/PKA 信号途径的促进作用，提高 了性激素生成关键酶基因的表达水平，最终使性激素的合成分泌增加。本文首次 提出久效磷农药调控性激素生成相关基因是通过活化 cAMP/PKA 这一信号途径 介导的，并通过对性激素生成关键酶基因的表达水平的影响来调控性激素的合成， 这为与久效磷农药同类型不能与雌激素受体结合的雌激素效应化合物的作用机 制研究提供了参考，也为久效磷农药发挥的多种毒性效应和其他内分泌扰乱作用 提供了理论基础。 关键词：久效磷农药，性激素生成，cAMP/PKA 信号途径，性激素生成相关酶， 虹鳟鱼性腺细胞系 II Effects of monocrotophos pesticide on steroidogenesis and its underlying mechanism in rainbow trout gonad cell line Abstract Monocrotophos (MCP) pesticide, listed as a UNEP Prior Informed Consent chemical, has been proved to exert toxic effects on the reproductive system of teleost fishes by changing the balance of sex steroid hormones. The biosynthesis of sex steroid hormones in teleosts is regulated by the transcriptions and/or activities of steroidogenic enzyme and also under the control of pituitary-secreted gonadotropins. In view of avoiding the potential cross-talk among different tissues, we used RTG-2 cells to investigate the mechanisms of MCP effects on steroidogenesis in fish. RTG-2 cultures were exposed to 40% MCP-containing pest