氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法的建立-分析化学.PDF

第45卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第3期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2017年3月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 403~408 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.160730 氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法的建立 施海燕摇 盛恩泽摇 马 明摇 华修德摇 王鸣华* (南京农业大学植物保护学院,南京210095) 摘摇 要摇 利用生物素鄄链霉亲和素的高亲和作用,研制了一种简便、快速、高灵敏的氯噻啉胶体金增强免疫层 析分析方法(Goldimmunochromatographicassay,GICA)。 将氯噻啉抗体和生物素化DNA与13nm胶体金双标 记,将链霉亲和素与41nm胶体金标记,制备了氯噻啉胶体金增强免疫层析试纸条。 系统优化了试纸条的工 作条件,并通过交叉反应、添加回收和高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)验证评 价GICA 的敏感性、特异性、精确性和准确性。 在最优条件下,试纸条可在10 min 内实现可视化判读,检出限 (LOD)为25 ng/ mL,除与吡虫啉有较大交叉反应外,与其它类似化合物无交叉反应。 氯噻啉在河水、大米、 黄瓜、番茄、梨、甘蓝和苹果样品中的添加浓度为0.05,0.5和5 滋g/ g时,GICA 的检测结果均符合添加水平。 在未知浓度河水和梨样品的检测中,GICA 的检测结果与HPLC方法相符。 关键词摇 氯噻啉;单克隆抗体;金标免疫层析分析;链霉亲和素;生物素 1摇 引言 氯噻啉是一种作用于烟酸乙酰胆碱酯酶受体的新烟碱类内吸性杀虫剂,因其活性高、毒性低、杀虫 谱广,被广泛应用于水稻、小麦、蔬菜、果树等作物,防治蚜虫、叶蝉、飞虱等刺吸式口器害虫,对鞘翅 [1] 目、双翅目和鳞翅目害虫也有效 。 随着氯噻啉使用量的提高,其残留问题也日益受到关注。 目前, 我国制定了糙米(0.1mg/ kg)、小麦(0.2 mg/ kg)、柑橘(0.2 mg/ kg)和茶叶(3 mg/ kg)中氯噻啉的临时 [2] [3~5] [6,7] 残留限量标准 。 氯噻啉残留分析方法主要有液相色谱鄄串联质谱法 、液相色谱法 和气相色谱鄄 [8] 质谱联用法 ,仪器分析方法准确、灵敏,但样品前处理较复杂,检测成本较高,难以满足大批量样品 的检测要求。 免疫分析方法具有快速、简便、经济、适合现场检测等优点。 酶联免疫分析(Enzyme鄄linked immu鄄 [9,10] [11] nosorbent assay,ELISA) 和荧光偏振免疫分析(Fluorescence polarization immunoassay,FPIA) 已成 功用于氯噻啉在环境和农产品中的残留检测,但这些方法仍存在需要专门检测设备、检测结果不直观 等缺陷。 胶体金免疫层析技术(Gold immunochromatographic assay,GICA)是一种可视化的免疫层析检 测方法,具有操作简单、制作成本低、结果易判读、无需检测设备等优点,广泛用于检测和诊断领域。 [12] 但该技术的灵敏度通常低于ELISA、化学发光免疫分析和荧光免疫分析等方法 。 因此,提高GICA 的灵