微泡菌ALW1褐藻胶裂解酶AlgL14的表达及信息学分析-集美大学.PDFVIP

　 第２３ 卷　 第５ 期 集美大学学报 （自然科学版） Ｖｏｌ． ２３　 Ｎｏ． ５ 　 　 ２０１８ 年９ 月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｍｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ） Ｓｅｐ． ２０１８ ［文章编号］ １００７ － ７４０５ （２０１８ ）０５ － ０３４ １ － ０８ ＤＯＩ ：１０ ． １９７ １５／ ｊ ． ｊｍｕｚｒ． ２０１８． ０５ ． ００４ 微泡菌ＡＬＷ１ 褐藻胶裂解酶ＡｌｇＬ１４ 的表达及信息学分析 １ １ １ ，２ ，３ ，４ １ ，２ ，３ ，４ １ ，２ ，３ ，４ １ ，２ ，３ ，４ 吴利洋 ， 梁梅芳 ， 倪　 辉 ， 肖安风 ， 姜泽东 ， 朱艳冰 （１． 集美大学食品与生物工程学院， 福建厦门３６１０２１； ２． 福建省食品微生物与酶工程重点实验室， 福建厦门３６１０２１； ３． 厦门市食品与生物工程技术研究中心， 福建 厦门３６１０２１ ； ４ ． 厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室， 福建 厦门３６１０２１） ［摘要］ 以微泡菌 （Ｍｉｃｒｏｂｕｌｂｉｆ ｅｒ ｓｐ． ） ＡＬＷ１ 的基因组为模板， 使用褐藻胶裂解酶ＡｌｇＬ１４ 特异性引物进 行ＰＣＲ 扩增， 将扩增产物克隆至ｐＭＤ１８⁃Ｔ 载体后进行测序， 并对该基因编码的蛋白质序列进行生物信息学 分析。 将目的基因插入ｐＥＴ⁃２８α （＋ ）表达载体， 转入Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＢＬ２１ （ＤＥ３ ） 中进行诱导表达， 并利用 亲和层析进行重组蛋白纯化。 结果显示， 克隆基因的大小为１ ３５０ ｂｐ ， 预测编码含有４４９ 个氨基酸残基的 蛋白质。 该蛋白质序列与其他菌株来源的褐藻胶裂解酶序列具有一定的相似性， 预测克隆的目的基因编码 褐藻胶裂解酶， 归属于ＰＬ⁃１４ 家族。 褐藻胶裂解酶ＡｌｇＬ１４ 的理论分子质量大小为４８ ７７２ ｋｕ ， 理论等电点 为６ ２７ 。 采用同源建模法建立菌株ＡＬＷ１ 褐藻胶裂解酶ＡｌｇＬ１４ 的三维结构， 富含β － 折叠。 将目的基因在 Ｅ ｃｏｌｉ ＢＬ２１ （ＤＥ３ ） 中进行诱导表达， 并纯化获得重组褐藻胶裂解酶。 ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ 分析显示， 表达的目的蛋 白分子质量约为４８ ８ ｋｕ 。 ［关键词］ 微泡菌； 褐藻胶裂解酶； 克隆； 基因表达； 信息学分析 ［中图分类号］ Ｑ ９３９ ９７ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｌｇｉｎａｔｅ Ｌｙａｓｅ ＡｌｇＬ１４ ｆｒｏｍ Ｍｉｃｒｏｂｕｌｂｉｆｅｒ ｓｐ ＡＬＷ１ １ １ １ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４ １ ２ ３ ４ ＷＵ Ｌｉｙａｎｇ ＬＩＡＮＧ Ｍｅｉｆａｎｇ ＮＩ Ｈｕｉ ＸＩＡＯ Ａｎｆｅｎｇ ＪＩＡＮＧ Ｚｅｄｏｎｇ ＺＨＵ Ｙａｎｂｉｎｇ １． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｉｍｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｘｉａｍｅｎ ３６１０２１ Ｃｈｉｎａ ２ ． Ｆｕｊｉａ