双色实时荧光PCR法-晋百慧生物.DOC

第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页 miR-92a含量检测试剂盒（荧光RT-PCR法）说明书 【产品名称】 通用名称：miR-92a含量检测试剂盒（荧光RT-PCR法） 【包装规格】 48份/盒 【预期用途请补充临床适应症，包括适用人群特征、肿瘤的组织类型及其在恶性肿瘤发生、发展过程中起到的作用】 请补充临床适应症，包括适用人群特征、肿瘤的组织类型及其在恶性肿瘤发生、发展过程中起到的作用 miR-92a来自人类13号染色体上的miR-17-92基因簇，是一类小分子非编码RNA，在大肠癌发展中有促进作用，它通过靶向抑制PTEN、KLF4和下游的p21基因来促进大肠癌细胞的增殖和迁移，在大肠癌患者粪便样本中miR-92a含量增高，可作为大肠癌标志物。 本试剂盒用于人粪便样本中的miR-92a含量测定，对临床医师建议做肠镜检测，但因病人依从性差或其它医学原因无法做肠镜检测的患者进行大肠癌的辅助诊断，不能作为肿瘤早期诊断或确诊的依据，不宜用于普通人群的肿瘤筛查，仅作为辅助诊断供临床医师参考。 【检验原理】 miR-92a含量检测试剂盒（荧光RT-PCR法）是采用RNA提取试剂盒提取粪便中的RNA，将提取的RNA稀释到6 ng/μL后进行RT-PCR反应请描述清楚，进行RT-PCR反应的应该是反转录产物，重点描述RT-PCR反应原理，请描述清晰，反应中的引物探针能够与miR-92a特异性结合并进行扩增，在扩增过程中探针与含miR-92a的模板链互补结合并释放荧光信号，被检测到的荧光信号强弱可以反映起始miR-92a的含量，根据样本中miR-92a含量高低辅助判定受试者是否患大肠癌。 请描述清楚，进行RT-PCR反应的应该是反转录产物，重点描述RT-PCR反应原理，请描述清晰 【主要组成成份】 成份 管数 装液量 miR-92a反转录反应液 1 185 μl miR-92a PCR反应液 1 800 μl miR-92a 反转录引物 1 25 μl miR-92aPCR引物、探针 1 85 μl miR-92a阳性质控品 1 20 μl miR-92a 阴性质控品 1 50 μl 反转录酶 1 33.5 μl RNA 酶抑制剂 1 6.5 μl Taq酶 1 15 μl 0.1%DEPC水 2 1200 μl 本产品配套使用的核酸提取试剂为深圳市晋百慧生物有限公司生产的核酸提取试剂，备案号为：粤深械。 注意：miR-92a阳性质控品需按检测方法中3.1说明进行稀释。 【储存条件及有效期】 试剂盒-20 ℃及以下 试剂盒在-20 ℃及以下条件下保存有效期为12 试剂盒使用时尽量避免反复冻融，冻融次数不得超过5次。 生产日期及使用期限见产品标签。 【适用仪器】 本试剂盒适用于ABI 7500、LightCycler 480实时荧光定量PCR仪。 本试剂盒要求仪器使用FAM通道采集扩增荧光信号。 【样本要求请说明如何在未设置内标的情况下对样本进行质控】 请说明如何在未设置内标的情况下对样本进行质控 本试剂盒适用于粪便样本的核酸检测，样本应避免为水状粪便。 样本采集量：粪便样本约0.3～0.5 g；样本采集及保存时，应对每份样本进行独立编号，避免样本混淆及样本间交叉污染。 储存和运输：样本采集后若不能立即检测，可置于-80 ℃保存； 样本在保存期间建议避免反复冻融。 样本RNA提取：本公司可提供RNA提取试剂盒。 【检验方法】 样本采集： 1.1 大便须排入一个干净的容器中，避免与水、尿液混合； 1.2 小心打开采样容器，用附在采样容器盖上的小匙来刮取适量粪便表面样本，去除明显食物残渣，避免样本粘附于容器外壁； 1.3样本采集后若不能立即检测，可置于-80 ℃保存，保存期为8个月 1.4在粪便表面刮取粪便样本作为待检测样本。明确取样方法，描述内容应和相关研究资料保持一致 明确取样方法，描述内容应和相关研究资料保持一致 2 RNA提取 2.1 取0.3-0.5 g的粪便样本到一新的2 mL离心管中； 2.2加入0.9 ml Buffer A，漩涡震荡1min使样品均匀分布，室温静置8min； 2.3 13000 rpm，4°C离心2 min后，吸取0.5ml 2.4 加入0.5 ml Buffer B，震荡10s混匀，室温静置8 min；然后加入0.2ml氯仿激烈振荡10s，静置10min； 2.5 13000 rpm ，4°C，离心10 min后；吸取上清液0.6 2.6 .在96孔板第一列孔中加入500μl无水乙醇、40μl B