医学毕业脐血cd34细胞体外扩增时hoxb4基因表达的变化.docxVIP

XX大学 毕业论文 脐血CD34+细胞体外扩增时H0XB4基因表达的变化 姓 名： 2014年6月25日 作者：唐宇宏，费小明，沈文怡，缪扣荣，崔毓桂，汪承亚 【摘要】同源盒基因家族成员HOXB4反映原始造血干/祖细胞(PHSC/PHPC) 的自我更新和增殖能力。本研究采用实时定量RT-PCR的方法在mRNA水平上 检测H0XB4基因的表达，以观察体外扩增脐血CD34+细胞自我更新的水平。结 果显示：随着体外培养时间的延长，虽然CD34+细胞数增加，但H0XB4表达下 降；周后，HOXB4几乎检测不到，与成熟外周血淋巴细胞表达HOXB4的水平 相同；CD34+细胞与骨髓间充质干细胞(BM?MSC)共培养可以减缓CD34+细胞 H0XB4表达的下降。结论：脐血CD34+细胞体外扩增过程中自我更新能力逐渐 下降。CD34+与BM-MSC共培养有助于减缓体外扩增的CD34+细胞自我更新能 力的丧失。 【关键词】 脐血CD34+细胞 Expression of H0XB4 in Cord Blood Progenitor Cells Expanded in vitro Abstract H0XB4, a member of homeobox gene family, is closely related to the self-renewing and proliferative ability of primitive hematopoietic stem/progenitor cells(PHSC/PHPC). This study was aimed to investigate the self-renewing level of cord blood progenitor cells (CBPC) expanded in vitro. The H0XB4 expression at mRNA level was assayed by using real time RT-PCR. The results indicated that as culture prolonged, the total cells, CD34+ cells greatly increased, however the H0XB4 expression gradually declined, even down to undetectable level similar to that of mature lymphocytes- Meanwhile, it was shown that CD34+ cells co-cultured with bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC) could abate the decline of HOXB4 expression. It is concluded that the self^renewing potential of CD34+ cells gradually decreased during expansion in vitro. co-culturc with BM-MSC was helpful to CD34+ cell expansion and slowed the loss trend of its self^renewal. Key words H0XB4； cord blood CD34+ cells； ex vivo expansion； bone marrow mesenchymal stem cell； real time RT-PCR 脐血是造血干细胞(HSC)的重要来源，但脐血量有限，单份脐血HSC往往 不能满足成年患者移植的需要。因此，许多人致力于体外扩增脐血造血干/祖细 胞(CBSC/CBPC)的研究。既往研究表明，FL、TPO、SCF等可以促使原始造血 祖细胞增殖，经2周的培养，CD34+细胞数量增加近百倍［l-3］o我们先前采用 骨髓间充质干细胞(BM?MSC)共培养，CD34+细胞比值增加更为明显［4］,但对 于体外扩增的CD34+细胞自我更新能力的水平并不清楚。 最近发现同源盒基因家族成员HOXB4作为一类转录因子，可正性调节 HSC的自我更新［5?7］。HOXB4在原始造血干细胞(PHSC)上高表达，随着 PHSC向各系分化，表达水平逐渐降低，直至消失［8］o因此认为：HOXB4表 达强弱能够作为一种衡量CD34+细胞白我更新能力的标志。本研究以实时定量 RT-PCR的方法检测HOXB4的表达，探讨造血因子刺激的单纯培养及以 BM-MSC为基质的体外扩增CD34+细胞能否维持其自我更新的能力。 材料和