介孔有机硅固定化脂肪酶的制备、性能及应用-生物工程专业论文.docxVIP

河北工 河北工业大学硕士学位论文 介孔有 介孔有机硅固定化脂肪酶的制备、性能及应用 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 摘 要 以表面活性剂为模板，硅氧烷为硅前驱体合成得到的有序介孔有机硅（PMOs） 是最早的杂化有机/无机材料之一。在之后的时间里，各种各样的功能基团嵌入到材料 结构中，多样化的形貌和广泛的应用伴随出现。在本论文中，以脂肪酶 Candida sp. 99-125 为目标酶，将其固定在 PMOs 上，并研究了固定化酶的性质和应用。具体的内 容总结如下： 以 1,2-二(三乙氧基硅基)乙烷为前驱体，三嵌段共聚物 P123 为模板，均三甲苯为 扩孔剂，合成了具有均一孔径、疏水特性的有序介孔有机硅材料，用于匹配并固定化 假丝酵母脂肪酶 99-125 以 提 高 其 活 性 和 稳 定 性 。 利用 吸 附 法 得 到 的固定化酶 （LP@PMO）催化水解反应、酯化反应和转酯反应，并与固定在亲水硅材料的固定化 脂肪酶（LP@PMS）和游离酶的催化能力做比较。LP@PMO 具有能够媲美游离酶的 水解活性，并在催化合成生物柴油反应中展现了大幅提高的催化活性和重复利用性。 除此之外，LP@PMO 还具有更佳的有机溶剂稳定性。 通过构建一种由 LP@PMO 稳定的 Pickering 乳液催化体系，进一步提高脂肪酶在 两相反应中的催化能力，并用作生物柴油生产中的催化剂。实验中首先优化了反应变 量，最佳条件如下：水含量 0.65 %，乙醇与油酸摩尔比为 2:1，固定化酶粒子 150 mg， 磷酸缓冲液 pH 7.0，反应温度 30 oC。在这些条件下，通过酯化反应得到的生物柴油 最高产率能达到 95.8 %。而 LP@PE 重复利用 15 次后，产物产率仍有 88.6 %。LP@PE 还可以用于催化麻疯树油与乙醇的转酯反应合成生物柴油，其最高产率为 87.1 %。在 连续反应 10 次后，产物产率仍保持在 73.0 %。此外，LP@PE 还具有优秀的储藏稳定 性和机械稳定性。 利用 LP@PMO 催化合成了一类糖基凝胶剂（命名为 Gmv），它能够在室温条件下 选择性的从油水两相中凝胶油相，而且仅需要真空蒸馏就可以实现凝胶油相的回收再 利用。Gmv 的合成是以甘露醇和辛酸乙烯酯为底物，过程绿色环保，产物经过纯化后 得率达到 41 %。利用 FTIR、XRD 和 NMR 方法表征 Gmv 的结构信息，并推断出其分 子式为 C22H42O8。在模拟实验中，Gmv 对柴油、汽油、橄榄油、食用豆油和甲苯的最 小凝胶浓度分别为 2 %、2.63 %、1.16 %、3.89 %和 1.02 %，且各凝胶的硬度均达到 了物理打捞的要求，证明 Gmv 确实能提供一种简单、成本低廉、绿色而有效的控制和 处理溢油的手段。 关键词：脂肪酶，介孔有机硅，Pickering 乳液，生物柴油，凝油剂 I II ABSTRACT Periodic Mesoporous Organosilicas (PMOs) were prepared by the combination of a surfactant as template and a silsesquioxane as the organosilica precursor and were one of the first examples of the so-called “hybrid’’ organic/inorganic materials. In the years that followed, an amazing variety of functional groups, morphologies and applications has been developed. In this study, lipase Candida sp. 99-125 was chosen as modal enzyme and immobilized onto PMOs. Then, the properties and applications of immobilized enzyme were investigeted. The details were summarized as follows: Using 1,2-bis(triethoxysilyl)ethane as a precursor, Pluronic P123 as a template, and 1,3,5-trimethylbenzene (TMB) as a pore expander, a hydrophobic silicate with uniform pore size suitable was synthe