假单胞菌CT25甲基黄嘌呤类物质降解途径研究及高耐咖啡因重组工程菌筛选-园艺专业论文.docxVIP

诚可爱的乔如颖、勤奋刻苦的高英、单纯善良的李永兰、霸气侧漏的赵敏师妹， 诚可爱的乔如颖、勤奋刻苦的高英、单纯善良的李永兰、霸气侧漏的赵敏师妹， 在生活中给我带来的快乐与感动。感谢新来的小伙伴施云龙、张伟、马一笑、 聂宁、傅秋月、林小明、陈书清、柯龙举，在实验上给予我的帮助和生活中给 我带来的欢乐。 感谢我单纯善良的室友王莉、刘瑜、张小焕，研究生生活因为你们变得更 加简单而快乐；感谢我的父母与家人，感谢你们对我无私的爱，对我无条件的 支持与鼓励。特别感谢我的爷爷，从我出生以来，对我深水静流般的爱。生命 不止，步履不停，你们无微不至的关怀与殷切期望是我前进的动力!祝福你们 永远健康、平安、幸福、快乐! 最后，衷心感谢参与本论文评阅、答辩及提出宝贵意见的所有老师和同学! 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 目录 目录 摘要 ． ．． I Abstract ．． ．III 第一章文献综述 ．．． ．． ．．1 1．1前言 ． 1 1．2咖啡因对微生物的影一向 ． ．．2 1．2．1咖啡因的抑菌作用及其机制 ．． ．． ．2 1．2．2耐咖啡因微生物生存机制 ．． ．．3 1．3微生物降解咖啡因速率及影响因素 ．．． ．．3 1．3．1微生物降解咖啡因的能力 ．3 1．3．2影n向咖啡因降解因素．．．． ．4 1．4微生物降解咖啡因的代谢途径 ．． ．5 1．4．1真菌降解咖啡因途径 ．． ．．．6 1．4．2细菌降解咖啡因途径 ．． 6 1．5微生物降解咖啡因的酶类 ． ．． ．7 1．5．1氧化酶 ． ．． ． ．8 1．5．2 N一脱甲基酶 ．． ．． ．． ．9 1．6微生物降解咖啡因相关基因 ．． ．．10 1．6．1 hpx基因簇 ． ． ．． ．． ．． ．．10 1．6．2 cdh和tmuM基因簇 ．．．．． ．． ． ． 11 1．6．3 m加基因簇 ．． ．． ．． ． ． ．11 1．7微生物降解咖啡因的应用 ． ．． 12 1．7．1降低产品咖啡因含量 ．． ．．13 1．7．2副产品的开发与利用．． ． ． ．13 1．7．3快速检测咖啡因法 13 1．8研究目的和意义．． ．． ． ． ．．14 第二章假单胞菌降解甲基黄嘌呤途径及其效率分析． ．．15 2．1前言 ． ． ．． ．．15 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 目录 2．2实验材料与方法 ． ．15 2．2．1材料和设备 15 2．2．2试剂和培养基配制．．． ．． ．16 2．2．3假单胞茵利用咖啡因特性分析 ．．16 2．2．4假单胞茵对不同甲基黄嘌呤利用速率和代谢途径分析 17 2．2．5甲基黄嘌呤及其衍生物检测 ．．17 2．3结果与分析 ． ．．17 2．3．1假单胞菌生长曲线和降解咖啡因特性 ．．18 2．3．2假单胞菌对不同甲基黄嘌呤降解效率 ．．19 2．3．3假单胞菌利用不同甲基黄嘌呤的可能代谢途径 23 2．4讨论与小结 ． ．．．． ．25 第三章假单胞菌降解咖啡因相关酶分析 ．． ．．27 3．1前言 ． ． ．27 3．2实验材料与方法 ．．27 3．2．1材料 ． ．．27 3．2．2培养基配制 ．． ．． ．．28 3．2．3菌粗酶提取与酶活性鉴定 28 3．2．4不同氮源条件下菌体蛋白组分差异分析 29 3．3结果与分析 ．． ．．． ．．．． ．． ．30 3．3．1咖啡因代谢相关酶细胞定位 ．． ．．30 3．3．2胞内酶对不同甲基黄嘌呤类化合物的降解效率 ．．．31 3．3．3咖啡因代谢相关蛋白特性 ． ．．33 3．4小结与讨论 ．． ． 34 第四章耐咖啡因重组子筛选及其生物信患学分析 ．． 36 4．1前言 ．． ． ．． ． ．．．36 4．2实验材料与方法 ．．． ．． 36 4．2．1材料和设备． ． ．36 4．2．2耐咖啡因重组子筛选 ． ． ．．37 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 目录 4．2．3初筛重组子插入序列分析 ． ．．37 4．2．4初筛重组子耐咖啡因效果分析 ．． 37 4．3结果与分析 37 4．3．1耐咖啡因重组子 ．．．．．37 4．3．2初筛重组子耐咖啡因能力评价 ．．47 4．4小结 ． ．． 48 第五章总结与展望 ． 49 5．1结论 ． ．． 49 5．2前景与展望 50 参考文献 ．5l 附录A 缩写词说明 60 附录B 图表索引 ．．61 万方数据 浙江大学硕士学位论文摘要 浙江大学硕士学位论文 摘要 生物途径降解咖啡因是一种非常有希望应用于低咖啡因茶产品生产的新 技术。本文在前期已筛选高耐咖啡因假单胞