减退的胰岛素信号通路在AD发病机制中的作用及艾塞那肽的神经保护机制-基础医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 1）研究减退的胰岛素信号通路在阿尔茨海默病（AD）发病机制中的作用； 2）研究艾塞那肽（Ex-4）的神经保护机制。 方法： 1）取 1、4、7、10 月龄野生型 C57BL/6 小鼠和 APP/PS1/Tau 三重转基因（3× Tg）小鼠进行实验。分别分为正常对照（WT，Tg）组和 2 型糖尿病（WT+T2DM， Tg+T2DM）组。3 个月建立 T2DM 模型成功后饲养 2 个月，各组小鼠生长为 6、 9、12、15 月龄。通过体重、血糖检测 T2DM 对机体代谢的影响；通过 Morris 水迷宫检测减弱的胰岛素信号对小鼠空间学习记忆能力的影响；通过 ELISA 检 测减弱的胰岛素信号对转入的人 APP 基因表达的脑内 A?42 沉积的影响；通过 Western blotting 检测减弱的胰岛素信号对脑内 Tau、神经丝（NFs）、胰岛素受 体底物（IRS）和 PI3K/Akt/GSK-3β 信号通路磷酸化水平的影响。 2）取 1、4、7、10 月龄野生型 C57BL/6 小鼠和 APP/PS1/Tau 三重转基因（3× Tg）小鼠进行实验。分别分为正常对照（WT，Tg）组，艾塞那肽（WT+Ex-4， Tg+Ex-4）组，2 型糖尿病（WT+T2DM，Tg+T2DM）组，2 型糖尿病+艾塞那 肽（WT+T2DM+Ex-4，Tg+T2DM+Ex-4）组。3 个月造模成功后治疗 2 个月， 各组小鼠生长为 6、9、12、15 月龄。通过体重、空腹血糖、腹腔糖耐量、胰岛 素耐量检测 Ex-4 对机体代谢的调节作用；通过 Morris 水迷宫检测 Ex-4 对不同 月龄小鼠空间学习记忆能力的影响；通过 ELISA 检测 Ex-4 对 A?42 沉积的影响； 通过 Western blotting 检测 Ex-4 对 Tau、NFs、IRS 和 PI3K/Akt/GSK-3β 信号通 路磷酸化水平的影响。 3）以 SH-SY5Y 细胞为研究对象，用 GLP-1 受体激动剂 Ex-4、低剂量 PI3K 抑 制剂 Wortmannin、GLP-1 受体拮抗剂 Ex9-39 研究 Ex-4 的神经保护机制，分为 （Con）组，（Ex-4）组，（Ex-4+W）组，（W）组，（Ex-4+W+Ex9-39）组， （Ex9-39）组。通过 MTT 检测 Ex-4 对低剂量 wortmannin 造成的细胞活力减低 现象的保护作用；通过 Western blotting 检测 Tau、NFs、IRS 和 PI3K/Akt/GSK-3β 信号通路磷酸化水平，分析 Ex-4 的神经保护机制。 结果： I 1）患 T2DM 的 15 月龄野生小鼠和 6、9、12、15 月龄 3×Tg 小鼠的平均逃避 潜伏期较各自对照组延长，穿越隐匿平台次数减少；野生小鼠没有人 APP 基因， 患 T2DM 的 3×Tg 小鼠脑内转入的人 APP 基因表达的 A?42 的沉积增多；T2DM 组小鼠脑内 Tau 蛋白和神经丝蛋白磷酸化程度加重，IRS 蛋白的磷酸化水平降 低，PI3K/Akt/GSK-3β 信号通路蛋白磷酸化水平降低。 2）Ex-4 能减轻高脂高糖饮食及 T2DM 造成的体重、空腹血糖的增加，减轻腹 腔糖耐量和胰岛素耐量受损程度，调节代谢改善小鼠胰岛素抵抗的程度。Ex-4 可改善减退的胰岛素信号通路对 15 月龄野生小鼠的空间学习记忆能力的损伤 程度及提高 6、9、12 月龄 3×Tg 小鼠的空间学习记忆能力，但对 15 月龄 3× Tg 小鼠的空间学习记忆能力的保护作用不明显。Ex-4 可减轻 A?42 的沉积，降 低 Tau、NFs 的磷酸化水平，提高 IRS 及 PI3K/Akt/GSK-3β 信号通