健骨颗粒对人成骨细胞芳香化酶活性及表达的影响-中医骨伤科学专业论文.docxVIP

上海第二医科大学硕士论文 上海第二医科大学硕士论文 中文摘要 健骨颗粒对人成骨细胞芳香化酶活性及表达的影响 中文摘要 目的：培养人成骨细胞，用中药血清药理学方法，观察健骨颗粒对成 骨细胞增殖分化、芳香化酶的活性及表达、雌激素受体表达的影响。 ／ f方法：制备含健骨颗粒血清及空白血清，分别干预培养的人成骨细胞， { MTT法及底物显色法观察对成骨细胞增殖分化的影响。氚水法检测芳 香化酶活性，提取人成骨细胞的RNA，设计芳香化酶不同第一外显子 的RT—PCR引物，检测健骨颗粒对芳香化酶基因的特异性调节。分别 设计职Q和ERB的RT—PCR引物，观察ER在人成骨细胞的表达及健 骨颗粒含药血清对ER表达的影响。 结果：当血清浓度为5％时，含药组已有促进人成骨细胞增殖的趋势， 但与空白组比较尚未表现出差异，PO．05。血清浓度为10％时，含健 骨颗粒血清刺激细胞增殖的作用明显，两组比较有显著差异，PO．05。 血清10％干预24小时两组细胞增殖未表现出明显差异，而干预48、 72 d,H,t含药组细胞生长速率明显快于空白组。含药组血清具有明显 刺激人成骨细胞分化的作用，在低浓度5％和空白组就有差异，随着 浓度升高含药组促进分化的作用也呈上升趋势。细胞干预72小时后， 加入[i D一3H]雄烯睾酮5．2Bq，分别温育2、4、6、8小时，测定芳香 化酶活性，结果发现，随着温育时间的增加，细胞酶活性逐渐增高， 6小时活性增加明显，在含药组达高峰，8小时含药组酶活性下降， 空白组仍有微弱上升趋势。含药组氚水的cpm数明显高于空白组。与 上海第二医科大学硕士论文 上海第二医科大学硕士论文 中文摘要 空白对照组相比较，健骨颗粒含药组芳香化酶开放阅读框架基因序列 电泳产物灰度值增强，Exonl．b与之具有一致性，而Exonl．a及 Exonl．d则无明显改变。这表I强健骨颗粒主要是通过Exonl．b来调节 人成骨细胞内芳香化酶基因表达。在培养的人胚成骨细胞中没有检测 较，能够提高雌激素受体 ER BⅡ删A表述卜 到ERⅡ表达，而ER B有表达。健骨颗粒含药血清与空白血清相比 结论：健骨颗粒含药血清能够促进人成骨细胞的增殖与分化，这种作 用具有量效关系。健骨颗粒含药血清能够提高人成骨细胞内芳香化酶 活性。健骨颗粒含药血清特异性通过Exonl．b在转录水平调节人成骨 细胞内芳香化酶基因的表达。健骨颗粒不仅适用于绝经后骨质疏松症 患者，还可以用于男性老年性骨质疏松的防治。 关键词：健骨颗粒，成骨细胞， ，芳香化酶，雌激素受体 上海第二医科大学硕士论文 上海第二医科大学硕士论文 英文摘要 Effect of JianGu Granules on activity and expression of aromatase in human osteoblast—like cells Abstract objective：砌vitro．the effect ofthe selldm containing JianGu Granules on proliferation and differentiation， activity and expression of aromatase，expression of estrogen receptor of in human osteoblast-like cells were observed Methods：Serum was divided into blank control group and JianGu Granules group，then treated human osteoblast-like cells．At first，the rate of cell proliferation and ALP activity were examined by the method of MTT and biochemical assay．Then the activity of aromatase were measured by isotopic assay．The expression of aromatase and estrogen