健胃愈疡颗粒对胃溃疡复发大鼠胃粘膜上皮细胞凋亡及其相关调控基因影响的研究-中西医结合临床内科专业论文.docxVIP

中南人学湘雅|i5薯院 中南人学湘雅|i5薯院 博l’学位论丈 中文攘翼 y“1 91 3 目的：f消化性溃疡(PU)是人类的一和 见疾病。现在的药物 L、 治疗虽能使95％以上的病例在短期内获得愈合，但其复发率很高。如 何防止该病的复发是目前医学界亟待解决的问题之～。溃疡的愈合是 一个极其复杂的过程，许多因子会对其产生直接或间接的影响。某些 炎症细胞因子，如自细胞介素一1 B(IL。l B)和肿瘤坏死因子一Q(TNF． Q)可阻止溃疡的修复，甚至引起溃疡的复发，有实验证实，在腹膜 内或皮下注射IL．1§或TNF．q，48h后可在原溃疡的同一部位引起 溃疡复发。Midkine(MK)是一个具有广泛生物活性的生长因子，能 刺激纤维细胞的增殖和促进血管的生成，这使其成为在溃疡愈合过程 中能发挥重要作用的因子之一。胃黏膜属于更新较快的组织，正常情 况下，存在～定的细胞凋亡与增殖，借以维护黏膜的生理平衡。在凋 亡的调节过程中，Bcl．2基因起着中心作用，其可抑制各种刺激所导 致的细胞凋亡，而Bax基因能促进各种因素所导致的细胞凋亡，因此， 两者对细胞的凋亡具有重要的调节作用，其比值的平衡关乎到细胞能 否正常的凋亡与存活。PU治愈后，若溃疡组织再生、血管重构等不 完全时，则可能导致黏膜上皮细胞的凋亡过快、增殖减慢，使这一平 衡被打破，从而导致溃疡的复发o】健胃愈疡颗粒具有疏肝健脾和胃的 功效，主治肝郁脾虚及肝胃不和之消化性溃疡。临床研究表明，该药 对胃、十二指肠溃疡具有良好的治疗效果，并能明显降低溃疡的复发 率。本课题拟以IL．1 B所致胃溃疡复发大鼠为模型，从胃黏膜上皮细 胞凋亡以及Bcl一2、Bax和MK表达办而，探讨健胃愈疡颗粒抗胃溃 I 中南夫学湘雅医院疡复发的分子生物学机理，从而为中医治疗PU提供进一步的实验依 中南夫学湘雅医院 疡复发的分子生物学机理，从而为中医治疗PU提供进一步的实验依 据。 厂 (方法：将110只犬鼠随机分为5组，即正常对照组，20 JI；假 手术组，20只；模型组，30只；胃苏颗粒组(简称胃苏组)，20只： 健胃愈疡颗粒组(简称健胃组)，20只。采用Okabe乙酸涂抹法制作 大鼠实验性胃溃疡模型。在对胃苏组、健胃组大鼠造模后24h，分别 灌服胃苏颗粒药液和健胃愈疡颗粒药液1ml／1009体重，分别相当于 2．709／kg体重和1．629／kg体重，每天一次。假手术组手术同模型制作， 仅以生理盐水代替乙酸注入玻管内。于术后24h，给假手术组、模型 组大鼠灌服蒸馏水，lml／1009体重，每天一次；正常对照组大鼠每天 灌服同样容积的蒸馏水。以上动物在给药、给水后第10天，各组中 随机取出10只大鼠处死，剖腹取胃，用于各项指标的测定。在给药、 给水后第90天，将模型组20只大鼠再随机分为两组，一组为模型复 发组(简称复发组)，另一组为模型未复发组(简称未复发组)，各 10只。除正常对照组、假手术组、未复发组大鼠腹膜内注射(ip)生 理盐水外，其余各组大鼠iplL—l岱lgg／kg体重；在注射48h、大鼠禁 食24h后，采用颈椎脱臼法将所有大鼠处死，剖腹取胃，用于各项指 标的测定。在对胃溃疡指数(Gastric ulcer index，GUI)进行检测以及 、 对胃组织进行病理学观察的同时，进行如下指标的检测：(1)胃黏膜 i){ 卜皮细胞凋亡的检测，采用TUNEL法；(2)胃黏膜Bcl．2和Bax蛋 ．■一 白质检测，采用免疫组化法；(3)胃黏膜Bcl．2和Bax mRNA表达的 检测，采用原位杂交法；t4)胃组织MKmRNA表达的检测，采用 中南人学湘雅医院 中南人学湘雅医院 博f．学位论文 原位杂交法。以上观察结果采用Leica Qwin图像分析系统进行分析 处理。 结果：(1)在给药后第10天，模型组、胃苏组、健胃组大鼠全 部发生了胃溃疡。但各组之间，溃疡的发病程度有显著的差异。胃苏 组和健胃组的GUI均明显低于模型组，而胃苏组的GUI明显高于健 胃组。在给药第90天，ip IL．1 B后，复发组的溃疡发生率显著高于 未复发组；胃苏组的溃疡发生率明显高于未复发组，而与复发组比较， 无显著性差异；健胃组的溃疡发生率明显低于复发组，而与未复发组 比较，无显著性差异。复发组的GUI显著高于未复发组；胃苏组、 健胃组的GUI与复发组比较，皆明显降低，而与未复发组比较，胃 苏组的显著增高，而健胃组的无显著性差异。(2)病理学检查显示： 在给药第10天，胃苏组和健胃组溃疡的病变程度较模型组轻，溃疡 边缘的黏膜层较模型组增厚，炎细胞浸润较模型组减少。在给药第 90天，ip IL一1 13后，复发组除1只未见溃疡外，其它大鼠均见有复发 溃疡，溃疡边缘仍可见残留再生之黏膜，溃疡底无新生肉芽组织，坏 死组织下为瘢痕