基于MLPA和DHPLC技术平台的家族性腺瘤息肉病家系致病性APC基因胚系突变筛查及突变分子机制分析-肿瘤学专业论文.docxVIP

南京医科大学硕士学位论文分类号： 南京医科大学硕士学位论文 分类号： R73 单位代码： 10312 密级： 学 号：南京医科犬掌 硕士学位论文 题 研究生： 陈青伟 指导教师： 冯继锋教授 学院名称： 壹室堕壁盔堂箜堕!鱼鏖堂堕 完成时间： 三Q二垂生垂旦 万方数据 南京医科大学硕士学位论文学名一 南京医科大学硕士学位论文 学名一明学位论文原创性声明 f舢Y舢2㈣8 1㈣6 9㈣2删0舢 作者签名：嘞、南件 日期：伊I与年1)月}口日 导师签名： 稻r1 日期：二矽d车舌月，口日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)： 1、保密口，在一年解密后适用本授权书。 2、不保密口。 作者签名： 压秀垆 日期：少f5年6月f L)日 导师签名： 冯e滞 日期：凇f厂年Z月／0日 1 万方数据 南京医科大学硕士学位论文目 南京医科大学硕士学位论文 目 录 中文摘要 1 英文摘要 3 刖舌 ．5 材料与方法 8 实验结果 ．21 讨论 ．．28 结论 ．．35 参考文献 ．36 附录(一)综述 ．41 附录(--)英文缩写一览表 ．6 1 附录()硕士期间发表论文情况 ．62 致谢 ．64 万方数据 南京医科大学硕士学位论文基于MLPA和DHPLC技术平台的家族性腺瘤息肉病家系 南京医科大学硕士学位论文 基于MLPA和DHPLC技术平台的家族性腺瘤息肉病家系 致病性APC基因胚系突变筛查及突变分子机制分析 摘要 目的：通过基因诊断技术寻找和分析家族性腺瘤息肉病(familial adenomatous polyposis，FAP)家系结肠腺瘤息肉病(adenomatous polyposis coli，彳PC)基因致病 性胚系突变及其特点，同时检测基于多重连接依赖性探针扩增(multiplex ligationdependent probe amplification，MLPA)和变性高效液相色谱技术 (denaturing High Performance Liquid Chromatography，DHPLC)技术平台的基 因诊断效力。 方法：提取2005年至2013就诊于我院的14个FAP家系成员外周血DNA，联 合应用MLPA、PCR-DHPLC技术及直接测序等方法对APC基因胚系突变进行 检测，寻找各家系APC基因致病性胚系突变。随后分析突变位点周围碱基序列， 探索APC基因胚系突变特点。 结果：14个家系中有6个家系筛查出了APC基因胚系突变，分别是 c．5432CT(p．Serl811Leu)、两个c．3926_3930delAAAAG(p．Glul309AspfsX4)、 c．3921-3924delAAAA(p．Ilel307Me如X13) c．3184_3187delCAAA(p．Glnl061AspfsX59) 和 c．4127_4126delAT(p．Tyrl376LysfsX9)，所有的缺失突变都导致了截断蛋白的产 生。14个家系中均未发现有大片段缺失与重复。分析缺失突变位点周围碱基序 列发现，c．3926 3930delAAAAG与c．392 1 3924delAAAA位于AAAAG短串联 重复序列中，c．3184 3187delCAAA位于间断的短串联重复序列中，而 c．4127 4128delAT则位于5-CCTGAACA．3’，3-ACAAGTCC．5回文序列(反向 重复序列)，并且大部分的突变位于密码子1309周围。 万方数据 南京医科大学硕士学位论文结论：包含短串联重复序列及回文序列的区域为APC基因致病性胚系突变高发 南京医科大学硕士学位论文 结论：包含短串联重复序列及回文序列的区域为APC基因致病性胚系突变高发 区域，以小片段缺失为主，尤其是密码子1309位点的5碱基缺失最为常见。基 于MLPA和DHPLC技术平台的基因诊断技术可快速、高效地进行基因突变筛 查。 关键词：家族性腺瘤息肉病；APC；多重连接依赖性探针扩增；变性高效液相 色谱 万方数据 南京医科大学硕士学位论文MLPA 南京医科大学硕士学位论文 MLPA and DHPLC technology platform based pathogenic APC gene mutation screening of familial adenomatous polyposis predigrees