多光谱成像系统快速使用说明.PDF

Nuance3.0快速使用指南 MD15460 Rev F, February 2012 明场成像 快速指南前提：基于Nuance 多光谱成像系统的正确安装、连接和配置以及与显微镜准确校准 1. 启动电脑并连接Nuance 的电源。在电脑启动的过程中，Nuance进行初始化：滤光片自检时前面板 上的扫描波长指示灯滚动闪烁。当CAMERA和STATUS指示灯稳定时初始化完成，打开Nuance操作软件。 2. 放置样本，显微镜调焦。调节光路使检测光全部进入Nuance系统。如果进行多光谱成像， 将面板前方 “MONO/MS”I滑块向右调节至 “MSI”位置。 3. 选择 “Acquire Brightfield”面板。如不能看到 “实时图像显示” （Live Stream）窗口, 点击 “Live”按钮以显示样本的实时图像。 4. 在”Wavelength And Exposure”框中，输入期望获得样本图像的波长(使用500nm或以上波长进行调焦)。 点击 “Autoexpose Mono”按钮，提高实时图像显示质量。手动调整曝光时间方法： a) 如果实时图像太暗，在 “Exposure (ms)”选项增加曝光时间。 b) 如果实时图像太亮或者曝光过度 （出现红色像素点），减少曝光时间。 5. 最大化实时图像窗口或者按 “Zoom”按钮，点击实时图像 （以点击位置为中心放大图像）或者在图像 上选取矩形区域 （将该区域图像放大），然后微调焦距。 6. 根据成像区域和图像质量的要求，选择 “像素合并比” （“Binning”）和 “感兴趣区域” （“Region-Of-Interest (ROI)”）.感兴趣区域越小；像素合并比越高；图像文件就越小。像素合并 比越高；成像灵敏度就越高，但是图像分辨率会降低。明场成像系统默认的像素合并比是1x1. 7. 在 “Filter/Wavelength Selection”组中对扫描波长进行 “Start”， “Step”和 “End”设置。 选择 “Narrow”复选框时，扫描带宽是20nm,无选择时带宽为40nm。具体参考Nuance User’s Manual。 8. 点击 “Autoexpose Cube”自动选择成像的曝光设置，当自动曝光完成时 “Use Custom Wavelengths and Exposures “复选框为选择。该情况适用于某一波长需要不同的 的曝光时间。 9. 在 “Optical Density”选择框中注意 “Convert To OD”复选框默认是选择的。当该复选框为选中状态 时，在获得多光谱 cube前一定要先获得参考cube。具体操作过程： a) 将采集样本移出视野 b) 点击 “Acquire Reference”按钮获得参考cube c) 将样本移回视野 10. 点击 “Acquire Cube “按钮采集设置波长范围内的数据cube。如果你想采集当前波长下的单色快照， 点击 “Acquire Mono”按钮。如果想获得当前波长下的RGB快照，点击 “AutoExpose RGB”按钮 再点击 “Acquire RGB”。 11. 当数据采集完成，数据浏览区显示一个标有代表色的图像结果。 12. 点击 “SaveCube”工具条图标存储数据模型， 选择存储路径并输入文件名。 （建议文件名格式：项目_样本_实验人_日期及时间）。 13. 选择数据cube 的存储格式： a) “Image Cubes” 将以CRi既定的.im3格式存储，此数据中包括硬件信息等设置信息。 b) “TIFF Cubes”将以一系列的TIFF 图像的格式存储，此时每一图像的文件名会添加相应的 波长信息。 14. 图像分离将下页说明。 Nuance3.0快速使用指南 MD15460 Rev F, February 2012 明场图像分离 工作站无须连接Nuance成像模块也可实现图像分离和数据分析 1. 在屏幕左边选择 “Spectra”面板。 2. 如果数据文件已经打开，它将在数据浏览区域显示。如果需要打开一个 文件，点击工具栏的 “Load Cube”。C