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基因工程:即 。通俗的说,就是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里, 地改造生物的 。 限制性内切酶(EcoRⅠ)作用过程 DNA连接酶的作用过程 第一步: * 基因工程及其应用 天竺中学 高三生物 2009.11.24 原 理: 操作水平: 结 果: 目的基因 供体细胞 受体细胞 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状,获得人类所需要的品种。 获得新性状 基因拼接技术或DNA重组技术 定向 遗传性状 二、基因操作的工具 1、基因工程的 指“ 限制性内切酶 ” 微生物 一种限切酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定切点切割 已发现的有200多种 种类: 来源: 特点: “ ” 这个特点说明了: 酶具有专一性 点击播放 1、被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端? 思考: 2、限制酶的发现有什么意义? 形成的黏性末端不同 基因工程创立的标志 不同的限制酶呢? 具有。 2:基因工程的 指“DNA连接酶” “ ” 作用: 连接“梯子”断口的“扶手”而非“梯子”中间的“踏板”。 其作用与限制性内切酶相反,作用点相同 点击播放 连接酶的作用是:将互补配对的两个黏性末端连接起来,使之成为一个完整的DNA分子。 3、基因工程的 目的基因 A、 条 件: 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 2、具有多个限制酶切点(每种限制酶切点最好只有一个),以便与外源基因连接 3、具有标记基因,便于进行筛选 B、常用 的运载体: 质粒、噬菌体和动、 植物病毒等 标记基因,便于进行检测。 其中质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子. C、它们的共同特点是: 都有侵染或进入宿主细胞的能力 三、基因工程基本步骤: 第二步: 获取目的基因 目的基因与运载体结合 方法: 1、直接分离:鸟枪法 2、人工合成: 注意:要保持基因的完整性 注意:要用同一种限制酶切取目的基因和运载体,并用DNA连接酶连接。 结果: 三种情况 结果要筛选 第三步: 第四步: 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测和表达 1、常用的受体细胞: 大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌、动植物细胞等 2、常用微生物作受体细胞的原因: 微生物增殖快、代谢快、目的产物多 3、若受体细胞为细菌应作何处理: 应用CaCl2处理 一般检测: 标记基因是否表达 目的是: 增大细胞壁的通透性 细菌和人是差异非常大的两种生物, 通过基因重组后,细菌能够合成人体的胰岛素,这说明了什么? 这可不是普通的细菌,它是嫁接了人胰岛素基因的工程菌,能大量合成人胰岛素。 人和细菌共用一套遗传密码 所有生物共用一套遗传密码 四、基因工程的成果及发展 1、医药卫生: a、药品生产 b、基因诊断与治疗 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 诊断原理: DNA分子杂交原理 生产胰岛素 2、农牧业与食品工业 生长快、肉质好的转基因鱼(中国) 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 环境监测 3、基因工程与生态环境保护 环境污染治理 利用基因工程培育的“指示生物”能十分灵敏地反映环境污染的情况,却不易因环境污染而大量死亡,甚至还可以吸收和转化污染物。 环境监测 基因工程做成的“超级细菌”能吞食和分解多种污染环境的物质。 通常一种假单孢杆菌只能分解石油中的一种烃类.用基因工程培育成功的“超级细菌”却能分解石油中的多种烃类化合物。 科学家还培育出能吞食转化汞、镉等重金属,分解DDT等毒害物质的细菌。 环境污染治理 转基因抗乙肝西红柿(中国),虽然不能治愈乙肝,但一年只吃几个抗乙肝西红柿,就完全能代替注射乙肝疫苗。抗乙肝西红柿属于转基因食品,就是将乙肝疫苗植入西红柿内,经过多代繁殖,使转入的基因稳定化。 用转基因的植物生产药物 基因治疗: 是指是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中,达到治疗疾病的目的。 患半乳糖血症的患者,由于细胞内半乳糖苷转移酶基因缺陷而缺少半乳糖苷转移酶,使过多的半乳糖在体内积聚,引起肝、脑等功能受损。 1971年,美国科学家在体外做了试验,用带有半乳糖苷转移酶基因的噬菌体侵染患者的离体组织细胞,结果发现这些组织细胞能够利用半乳糖了。这表明,用基因替换的方法治疗这种遗传病是可能的。 取患者骨髓 分离干细胞 病毒 正常基因 并入正常基因的干细胞 注入患者体内 * * *
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