HPLC色谱法测定宫血宁分散片中重楼皂苷I的含量.DOCVIP

高效液相色谱法测定三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ的含量 吴莉1 江伟1 刘永忠2 （1江西省上高县人民医院 上高336400；2江西中医药大学 南昌330006） 摘要：目的：建立高效液相色谱法测定三七血伤宁分散片中主要成分重楼皂苷Ⅰ的含量。方法：Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-水（40：60）为流动相；检测波长203nm；流速：l ml/min；柱温：40 ℃。结果：重楼皂苷Ⅰ在具有良好的线性关系（r=0.9986，n=6）；平均加样回收率为99.68%（n=6），说明回收率良好。结论：用高效液相色谱法测定三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ，方法简便，重现性好。 关键词：三七血伤宁分散片；重楼皂苷Ⅰ；HPLC法；含量测定 中图分类号：R284.1 文献标识码：B 三七血伤宁分散片由三七血伤宁胶囊经改变剂型加工制成。分散片具有多种优良性能，在水中可迅速崩解，均匀分散，相对于普通 HYPERLINK /doc/6749214-6963760.html \t /doc/_blank 固体制剂，具有服用方便、溶解吸收快速、生物利用度高、能降低药物的 HYPERLINK /doc/6636067-6849875.html \t /doc/_blank 不良反应等特点[1]。而且，它制备简单，工艺和普通片剂相同，对生产设备无特殊要求。三七血伤宁胶囊临床上主要用于止血镇痛，祛瘀生新，对瘀血阻滞、血不归经之各种血证及瘀血肿痛有良好疗效，具有凉血、收涩止血之功效[2]。 1 仪器与试剂 Waters高效液相色谱仪（515型双元泵，996光电二极管矩阵检测器，7725进样阀，Waters色谱工作站）；Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150×4.6 mm，5 μm）； EJ-2000电子分析天平（ HYPERLINK /changshang/184_ribenAND_1.html \o 日本AND 日本AND）。乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），水（重蒸馏水）。三七血伤宁分散片（自制，批2014080220140804）；重楼皂苷Ⅰ（上海一基生物试剂有限公司，批号：200802）。 2 实验方法 用高效液相色谱法测定自制三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ的含量[3~5]。 2.1 色谱条件 Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（40：60）；检测波长203 nm；流速：l ml/min；柱温：40℃。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品重楼皂苷Ⅰ适量，加甲醇适量使之完全溶解，制成每1 ml含0.5 mg重楼皂苷Ⅰ的溶液，备用。 2.3 供试品液的制备 随机取本品10片，称重，研细，精密称取适量（约相当于重楼皂苷Ⅰ125 mg），置50 ml具塞烧瓶中，加40 ml甲醇，超声处理40 min（功率250 W，频率25 KHz）。取出后放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀后过滤，甲醇洗涤3次，合并滤液，以0.45 μm微孔滤膜滤过，25 ml甲醇定容，即得。 2.4 回收率实验 取一定量供试品，采用加样回收法，加入一定量对照品溶液，按供试品溶液的制备进行实验，n=6，本品所拟的含量测定方法测定均有良好的回收率。见表1。 表1 三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ回收率试验结果 本底值（mg） 加入量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） 5.006 4.06 9.11 100.5 5.015 4.00 9.20 102.1 5.018 5.60 10.31 98.0 5.214 5.14 10.32 99.7 99.68 6.236 6.58 12.67 98.8 6.577 6.33 12.78 99.0 2.5 标准曲线的测定 精密称取对照品5.08 mg置5 ml定量瓶中，加甲醇使之完全溶解，并稀释至刻度，摇匀。准确吸取2 μl、5 μl、10 μl、15 μl、20 μl注入高效液相色谱仪中，测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，将进样量与峰面积进行回归处理，回归方程为：Y=2130407.3X+2658.65，r=0.9986，重楼皂苷Ⅰ在2.032~20.32 μg范围内进样量与峰面积有较好的线性关系。 2.6 样品含量测定 精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μl，按2.1项下条件，分别注入高效液相色谱仪进行含量测定，测定4批三七血伤宁分散片