基于单壁碳纳米管壳聚糖检测赭曲霉毒素A的电化学免疫传感器的构建-公共卫生专业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 OTs Ochratoxin 赭曲霉毒素 OTA Ochratoxin A 赭曲霉毒素 A ALP Alkaline phosphate 碱性磷酸酶 α-NP α-naphthyl phosphate α-萘酚磷酸盐 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 BEN Balkan endemic nephropathy 巴尔干肾病 SWNTs –COOH Carboxylation functionalized single-walled carbon nanotubes 羧基化单壁碳纳米 管 DEA Diethanolamine 二乙醇胺 DPV Differential pulse voltammetry 差分脉冲伏安 CS Chitosan 壳聚糖 EDC 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopro-pyl) carbodiimede 碳化二亚胺盐酸盐 NHS N-hydroxysuccinimide N-羟基硫代琥珀酰 亚胺 ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附 GCE Glass carbon electrode 玻碳电极 HPLC High performance liquid chromatography 高效液相色谱分析 SPE Screen-Printed Electrode 丝网印刷电极 TLC Thin-layer chromatography 薄层层析分析 PBS Phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 SWV Square wave voltammetry 方波伏安 EIS Electrochemical impedance spectroscopy 电化学阻抗 ZEA Zearelenone 玉米赤霉烯酮 AFB1 Aflatoxin B1 黄曲霉毒素 B1 FB1 Fumonision B1 伏马毒素 B1 1 基于单壁碳纳米管/壳聚糖检测赭曲霉毒素 A 的电化学 免疫传感器的构建 摘要 赭曲霉毒素（Ochratoxins，OTs）是一类主要由赭曲霉和纯绿青霉 等产毒菌株产生的一系列结构相似的次生代谢产物，其中以赭曲霉毒 素 A（OTA）污染范围最广，毒性最大，对人类的健康影响最大。我 国现行的国家标准《食品中真菌毒素限量》规定：谷物、大豆及其加 工产品中赭曲霉毒素 A 的含量不得超过 5μg/kg。因此，需要一种简单、 灵敏、有效且快速的检测方法对食品中的 OTA 进行监测。本研究根据 间接性免疫竞争的原理，利用游离 OTA 和赭曲霉毒素 A-牛血清白蛋白 （OTA-BSA）竞争结合定量的 OTA 单克隆抗体，研发了一种快速检测 OTA 的电化学免疫传感策略。首先将 OTA-BSA 抗体蛋白固定在事先 已经用羧基功能化的单壁碳纳米管/壳聚糖纳米复合材料修饰好的玻碳 电极表面以获得所需要的电化学免疫传感器。然后，将稀释后的 OTA 单克隆抗体和一系列不同浓度的 OTA 标准溶液同时滴加到固定有 OTA-BSA 的传感界面进行竞争反应。竞争反应完成后，在电极表面滴 加碱性磷酸酶修饰的抗小鼠 IgG 的二抗（ALP-anti-antibody），通过 ALP 催化反应底物中的 α-萘酚磷酸盐（α-NP）而产生电化学信号。该传感 器检测 OTA 的线性范围为 0.01-100ng/ml，检测限为 4pg/ml，低于意大 2 利规定的婴幼儿及儿童食品中 OTA 的限定值（0.5μg/kg）。本研究成功 的研发了一种灵敏度高、特异性好、具有可重复性的电化学免疫传感 器用于检测 OTA，该传感器将成为食品安全领域 OTA 定量检测的一种 有力的工具。 关键词：赭曲霉毒素 A，电化学免疫传感器，复合纳米材料 3 AN ELECTROCHEMICAL IMMUNOSENEOR FOR OTA DETECTION USING SINGLE-WALLED CARBON NANOTUBES/CHITOSAN ABSTRACT Ochratoxins (OTs) are naturally found as secondary metabolites of Aspergillus ochraceus and Penicillium viridicatum. Among them, ochratoxin A (OTA) can contaminate a wide variety of foods and highly detrimental for human health. The