葡聚糖抗体的制备及其Elisa检测方法的建立-食品与生物技术学报.PDF

研究论文研究论文 谢 珍茗 ，等 ： 葡聚糖抗体的制备及其 Elisa 检测方法的建立 葡聚糖抗体的制备及其Elisa 检测方法的建立 谢珍茗 ， 方丽莎 ， 孙 明 ， 余 林 * （广东工业大学轻工化工学院，广东广州 510003 ） 摘要： 制备并筛选葡聚糖拟糖蛋白抗原 ， 通过动物免疫获得葡聚糖多克隆抗体并建立葡聚糖的 Elisa 检 测方法 ，应用于实际样品检测 。 以还原胺化法制备大分子葡聚糖-牛血清蛋白 （BSA ）拟糖 蛋白质 ，通过 SDS与自由氨基测定 ，优化葡聚糖拟糖蛋白抗原制备反应 ，建 立直接竞争 Elisa 筛选抗原活性 。 以制得的葡聚糖 T40-BSA 拟糖蛋白抗原为免疫原 ，经过免疫白兔后获得高 效价多抗 ；建立检测葡聚糖多抗的间接非竞争 Elisa 方 法。 确定拟糖蛋白抗原的最佳制备条件 （n （葡聚糖 ）/n （氧化剂 NaIO4 ）=1/120 ，偶联 时 间 24 h ）；筛选获得不同制备条件 下与标准抗体 结合最 强的抗原产物 T40-BSA ，动 物免疫获得多抗 ，优化实 验 条件 ：以质量浓度 10 μg/mL 的 T40-BSA 为 包被 抗原 ，37 ℃时血 清多抗和酶标 多抗的反应时 间均 为 45 min ，质量分数 5% 小牛血清为封闭 液后 洗板 ； 建立 了基于 T40-BSA 拟糖蛋白抗原的 不同相对分子质量 葡聚糖间接竞争 Elisa 检 测 方法 ，并应用于对市售 白糖 中葡聚糖 T40 的含 量检测 。 研究结果表 明 ，葡聚糖-BSA 拟糖蛋白抗 原制备条件 不同 ，对其免疫活性有影响 。 建立的检测方法有良好 的线性 ，能用于实际样品 中葡聚 糖含量 的检测 。 关键词： 葡聚糖 ；拟糖蛋白抗原 ；制备 ；抗体 ；酶联免疫分析 中图分类号： 文献标志码： 文章编号： — （ ） — — Q 539 A 1673 1689 2013 12 1319 08 Preparation of Dextran Antibody and Establishment of Its Elisa Immunoassay * XIE Zhen-ming ， FANG Li-sha ， SUN Ming ， YU Lin （Faculty of Light and Chemical Engineering ，Guangdong University of Technology ，Guangzhou 510003 ，China ） bstract ： this study ， ran neoglycoprotein antigens were prepared evaluated and finally A In dext obtained dextran polyclonal antibodies ， an enzyme-linked immunosorbent assay （ lisa ） ection and E det method was developed according to Elisa theory. The method was put to use for quantitative analysis