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试验十肝中酮体生成作用
实验十二 肝中酮体生成作用
【目的】
1．了解肝中酮体生成实验的原理和方法。
2. 验证酮体生成事肝脏特有的功能。
【原理】
用丁酸作为底物，将丁酸溶液分别与肝匀浆和肌匀浆保温。肝细胞中含有酮体生成酶系，故能生成酮体，酮体中的乙酰乙酸与丙酮可与显色粉中的亚硝基铁氰化钠作用，生成紫红色化合物。肌肉中没有生成酮体的酶系，同样处理的肌匀浆则不产生酮体，因此不能与显色粉产生颜色反应。
【器材】
小白鼠、匀浆机或研钵、恒温水浴箱、离心机、剪刀、白瓷反应板、试管、滴管、试管架。
【试剂】
1.0.9%氯化钠溶液。
2.洛克溶液
取氯化钠0.9g、氯化钾0.042g、氯化钙0.024g、碳酸氢钠0.02g、葡萄糖0.1g放入烧杯中，加蒸馏水溶解后，加水至100ml,置冰箱中保存备用。
3. 0.5mol/L丁酸溶液
取44.0g丁酸溶于0.1mol/LNaOH溶液中，加0.1mol/LNaOH溶液至1 000ml。
4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.6）
准确称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·2H2O）7.74g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）0.897g，用蒸馏水稀释至500ml，准确测定pH值。
5.15%三氯醋酸溶液。
6.显色粉
亚硝基铁氰化钠1g，无水碳酸钠30g,硫酸铵50g,混合后研碎。
7.家兔（或小鼠）
【操作】
1．肝匀浆和肌匀浆的制备 取小鼠一只，断头处死，迅速剖腹，取出肝和肌组织，剪碎，分别放入匀浆器或研钵中，加入生理盐水（重量:体积为1:3）,研磨成匀浆。
2．取4支试管，编号后按下表操作：
表3-14 酮体生成试验操作步骤
加入物（滴）
1
2
3
4
洛克溶液
15
15
15
15
0.5mol/L丁酸溶液
30
－
30
30
0.1mol/L磷酸盐缓冲液
15
15
15
15
肝匀浆
20
20
－
－
肌匀浆
－
－
－
20
蒸馏水
－
30
20
－
1．将上列4支试管摇匀后放37℃恒温水浴中保温30分钟。
2．取出各管，每管加入15%三氯醋酸20滴，摇匀，离心5分钟（3000转/min）。
3．分别于各管取离心液滴于有凹白瓷反应板中，每凹放入显色粉一小匙(约0.1g)，观察并记录每凹所产生的颜色反应。
【结果及分析】
观察各管颜色变化，并分析实验结果。
【思考题】
1．什么是酮体？酮体的生成与利用有何特点？
2．酮体代谢有何生理意义，严重糖尿病患者为何导致酮血症和酸中毒？
3．本实验中，第1及第4管离心液，与显色粉各产生何颜色反应？说明原因?
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