耐碱性甘露聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达-微生物学报.PDF

卷 期 ! ! 微 生 物 学 报 ’( )! /’ )! 年 月 #$$ % !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,+-. #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 耐碱性甘露聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 3 # 3 3 谭秀华 武玉永 马立新 蒋思婧 3 （湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室 武汉 !1$$0# ） # （滨州医学院细胞生物学教研室 滨州 #00$1 ） 摘 要：通过功能平板从土壤中筛选得到含甘露聚糖酶基因的耐碱菌株。构建其基因组文库，从中筛选到甘露聚 糖酶基因 并测序分析，用 分析表明， 的氨基酸序列与其他在 发表的甘露聚糖酶的氨基酸 6D3 4E*F6 6D3 G7?4:?H 序列的同源性均低于 ，故确定其为一个新的甘露聚糖酶基因（ 登录号为 ）。将此基因去除信 0$ I G7?4:?H *J0#18$1 号肽后的编码序列克隆到表达载体 KL4D8$M 上，得到重组质粒 KL4D3#$3。经 !# 酶切后分别转化毕赤酵母 ! （ ） 、 、 ，得到分泌表达的重组毕赤酵母。挑选相对表达量最高的重组毕赤酵母 $%’% ( )*+,%) ND23 GF33 FDO330% 在摇瓶中诱导产酶，对该酶的粗酶进行酶学性质分析表明，其最适反应温度为 ，最适 值为 ， FDO330%51 P QL 2 R 以魔芋粉为底物所测得的最高酶活为 ，半衰期为 ，在 保温 其酶活由最初酶活的 下降到 !3R%S 3A %$P =? 22 I 33I ，温度下降到P后活性可恢复到最初酶活的0$ I 以上。 关键词：甘露聚糖酶，克隆，毕赤酵母，表达，酶活 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） T2% * $$$350#$8 #$$ $!5$!15$! 甘露聚糖酶（ ， ； 5 53 !5O5=:??:? =:??’AUVW’(:-7 ! 材料和方法 M1 R# R 3R2%）是一类降解甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、 半乳甘露聚糖和半乳葡萄甘露聚糖的主链 ， ! ! 材料 53 !5O5