用疏水色谱对还原型胍变性牛胰岛素的折叠特性研究.PDF

V o l. 23 高 等 学 校 化 学 学 报 　　N o. 8　 2 0 0 2 年 8 月 　　 　　　　　CH EM ICAL JOU RN AL O F CH IN E SE U N IV ER S IT IE S　　　　　　　　　 1483～ 1488　 用疏水色谱对还原型胍变性牛胰岛素的 折叠特性研究 白　泉, 孔　宇, 耿信笃 (西北大学现代分离科学研究所, 现代分离科学陕西省重点实验室, 西安 7 10069) 摘要　用疏水相互色谱(H PH IC) 对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究. 结果表明, 采用普通流动相时, 对还原胍变胰岛素的复性效果较差, 而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到 66% , 并用反相色谱( ) 、紫外吸收光谱、荧光光谱及 对其复性效果进行了验证. 同时与体积排 R PL C M ALD I TO F 阻色谱(SEC ) 和稀释法对还原胍变胰岛素的复性结果进行了比较. 结果表明, SEC 根本无法使还原胍变胰 岛素复性, 而稀释法的复性效率仅有 2%. 这进一步表明H PH IC 是变性蛋白复性的有效工具, 变性蛋白在 疏水界面折叠过程中, 蛋白质与固定相之间的疏水相互作用对蛋白折叠起着关键性的作用, 是蛋白折叠的 主要驱动力. 关键词　疏水色谱; 蛋白折叠; 还原变性; 胰岛素; 体积排阻色谱; 稀释法 中图分类号　 657. 7　　　　文献标识码　 　　　　文章编号　025 10790 (2002) O A 对于还原变性蛋白的复性, 通常在复性溶液中加入氧化剂, 如氧化型谷胱甘肽(GSSG) , 进行稀释 [ 1 ] [2 ] [3 ] 或透析, 使二硫键在氧化条件下正确对接 . 还有人加入二硫键异构酶 和分子伴侣 催化二硫键的 [4 ] 正确配对, 从而提高蛋白的复性效率. 近来人们利用液相色谱进行变性蛋白折叠与复性的研究 . 耿 [ 5 ] ( ) 信笃等 早在 10 年前就用疏水相互作用色谱 H PH IC 对