建立整体、细胞水平客观、高效药效评价模型-药理学专业论文.docxVIP

塑翌奎兰堡主兰垡堡苎————建立整体、细胞水平客观、高效药效评价模型 塑翌奎兰堡主兰垡堡苎———— 建立整体、细胞水平客观、高效药效评价模型 浙江大学医学院药理学 2000硕士研究生： 王一奇 导 师：魏尔清教授 摘 要 f3、^ ， 目∥务： ／医药产业的快速发展，越来越要求药物开发的高质量剃高效率。近来在新药研究申， ＼ 一方面出现了细胞水平高通重筛选体系，利用高度的自动化设备和直观简便钓检测方法进行 人规模的药物筛选，较传统的新药开发速度有了从鬣到质的E跃。另一方面．在整体动物 实验的药效评价中，特别对于神经一精神系统药物的评价采用计算机辅助方法。可以提高客观、 定量程度和研究效率。因此，要建立神经系统创新药物研制技术平台。需要解决药物体外高 通量筛选方法以及整体动物实验药效评价的客观、定量和高效率问题。根据药物研制中的上 、丘，—一 述要求，结合本实验室现有条件，)我们利用计算机视频跟踪系统和本实验室开发的l璺l像分析 ／ 软件研究NIH、ICR、昆明种小鼠开场实验自发活动特点，并以戊巴比妥为工具药建立了计算 机辅助开场实验对中枢抑黼药的新评价模型：此外，在缅胞水平我们}}j徽孔板酶标检测仅， ·●■■■■■■■r 建立了96微孔板NMDA诱导的神经元损伤保护药物筛选模型，为本实验室神经系统创新药 物研制技术平台的建立打下基础。 ／ ／1、整体水平药效客观评价：建立计算机辅助开场实验对中枢抑制药的新评价模型 I 、用开场实验观察小鼠进入新环境的自发活动特点，并用计算机图像处理系统记录，分析 小鼠30 min内的活动轨迹，观察不同时间段的总路程、中央逗留时间、中央路程3个参数． 还观察了腹腔注射不同剂量戊巴比妥对自发活动特点的影响。结皋发现，各种小鼠总路程在 前10min明显大于后20min(P0．00 1)：中央逗留时阊祁中央路程变化较小。但存在一定的 品系和昼夜差异．戊巴比妥可减少[CR和NIH小鼠(昆明种小鼠无效)的总路程，但无典型 塑坚查堂堡主堂竺堡苎 塑坚查堂堡主堂竺堡苎 一—— 的量效关系；但可剂量依赖性减少各种小鼠中央逗留时间和中央路程(P(O．01)。表明我们建 立的方法能反映小鼠自发活动特点，并可用于评价中枢抑制药作用，其中中央逗留时问和中 央路程是稳定、敏感的指标。 2、细胞水平高效率药效评价：建立96徼孔板神经元损伤保护药物筛选模型 用96徽孔板原代培养的新生大鼠神经元体外培养至第lO天(DIVl0)时，用不同浓度的 NMDA处理不同时间，以形态学和MTT染色为指标观察神经元的损伤情况．并观察了NMDA 受体拮抗剂氯胺酮和抗炎症药米诺环紊(minocycline)对50 v．mol／LNMDA处理3 h造成的皮 层神经元急性损伤的作用以及minocyeline对正常皮层神经元的影响。结果表明，随着NMDA 浓度的增加和作用时间的延长，其神经毒性增加。氯胺酮100、10、1 i．tmOl／L和minoeye|ine 135、 45 pmol／L预处理对50 l_tmol／L NMDA处理3 h造成的皮层神经元急性损伤有明显的保护作用 (P(0．01)；但是mittocyeline在NMDA处理后绘药则无保护作用。Minoeycline 135、45 pmoVL 作用24 It对DIV4、DIV7、DIVl0的神经元都有一定的毒性(P0．01)，但神经元体外培养 的时间越长，毒性越小；但是Minoeyeline 135、45 gmol／L作用3 h对DIVl0的神经元无明显 影响。这一结果表明，96微孔板培养的原代神经元可以用于评价药物对神经元损伤的保护作 用及对神经元的毒性作用。 k／丘——、／一 3√结 论， ／ 本实验第一部分用计算机辅助开场实验建立了中抠抑制药的新评价模型，该模型可客观、 定量、灵敏地评价中抠抑制药作用。其中中央逗留时间和中央路程是稳定、敏感的指标。第 二部分用NMDA诱导皮层神经元损伤建立了保护药物96微孔板筛选模型，并以氯胺酮为阳 性药验证了模型的可靠性。在该模型基础上证明了minoeycline高剂量对NMDA诱导的皮层 阜 神经元损伤有保护作用，但对正常皮层神经元有毒性作用。 “-_·，” 关键词：羽啄两ii巨多年枢抑制药；开场实验；计算机辅助技术、—’-—-_p一 伤；神经保护药， 2 浙江大学硕士学位论文Development 浙江大学硕士学位论文 Development of an objective evaluation／n vivo and a high—efficient eval