碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究-眼科学专业论文.docxVIP

中山大学博士后出站报告：碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究 中山大学博士后出站报告：碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究 碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究 专 业： 眼科学 博士后： 凌士奇 合作导师：刘祖国 中文摘要 角膜碱烧伤是最常见的眼化学伤，由于碱性物质能迅速地穿透角膜组织并破 坏深部眼组织，碱烧伤往往造成角膜及眼前段组织的严重损伤而导致永久性视力 缺损。目前有关角膜碱烧伤的研究已引起了广泛地重视并不断地深入。 近来的研究认为免疫系统参与了角膜碱烧伤的病变过程。我们前期的研究发 现碱烧伤角膜中同时存在着新生血管和新生淋巴管。从免疫学角度讲，血管提供 了效应细胞进入的“入口”，而淋巴管则提供抗原提呈细胞进入引流淋巴结诱发 免疫应答的“出口”。因此研究碱烧伤后角膜新生淋巴管的变化对于阐明碱烧伤 后的免疫损伤机制，提高角膜移植预后具有积极的作用。 本课题进一步证实碱烧伤角膜中新生淋巴管的存在，并检测其动态变化；阐 明角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管与血管、炎症之间的关联；定量检测血管内皮生 长因子c(vascular endothelial growth factor C，VEGF-C)在碱烧伤后角膜中的动 态变化，进一步探讨碱烧伤角膜中新生淋巴管产生的分子调控机理。 中山大学博士后出站报告；碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究第一部分大鼠角膜碱烧伤后的角膜新生淋巴管 中山大学博士后出站报告；碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究 第一部分大鼠角膜碱烧伤后的角膜新生淋巴管 目的为碱烧伤角膜中新生淋巴管的存在提供进一步的证据。 方法制备大鼠角膜碱烧伤模型，于烧伤后3d、1w、2w末分别作角膜组织电镜检 测、淋巴管内皮细胞受体(1ymphatic vessel endothelial receptor，LYVE-1)免疫 组织化学染色、Lectin—FITC心脏荧光灌注联合CD3l全角膜免疫荧光法检测角膜 新生淋巴管的状况。 结果电镜检测证实角膜碱烧伤后2w末角膜基质层在存在新生血管的同时，出现 了角膜新生淋巴管．LYVE．I免疫组织化学染色及全角膜荧光法均提示角膜碱烧 伤后3d时即存在着角膜新生淋巴管。 结论角膜碱烧伤后有角膜新生淋巴管生成。 第二部分碱烧伤角膜中新生淋巴管、新生血管及炎症间的关联 目的阐明角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管与血管、炎症之间的关联。 方法制各大鼠角膜碱烧伤模型，5’核苷酸酶一碱性磷酸酶(5-nase-atpase, 5’-HA．ALP)双重酶组织化学染色法检测碱烧伤后6h、ld、3d、1w、2w、撕、钾、 5w、6W、7w、8W末时的角膜新生淋巴管和血管的动态变化，并统计淋巴管数日 (1ymphatic vessels countin8，LVC)和血管的数I|(blood vessels counting，BVC)。髓 过氧化酶法(myeloperoxidase,MVO)检测各时间段角膜中的多形核白细胞 (polymorphonuclear leukocyte，PMN)，记录各时间段炎症指数(inflammation Ⅱ 中山大学博士后出站报告：碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究index，tFI)，以评估角膜碱烧伤后角膜炎症的动态改变，并比较及分析碱烧伤后角 中山大学博士后出站报告：碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究 index，tFI)，以评估角膜碱烧伤后角膜炎症的动态改变，并比较及分析碱烧伤后角 膜新生淋巴管、新生血管及角膜炎症之问的关联。 结果角膜碱烧伤后，新生淋巴管的出现滞后于新生血管，碱烧伤后2W末时，两 者同时到达高峰，之后下降，新生淋巴管先于新生血管而消退。新生淋巴管和血 管之间呈高度相关(，卸．965，PO．01)。碱烧伤后，角膜炎症先于新生淋巴管而达 到高峰，新生淋巴管与炎症指数问呈高度正相关驴：0．505，P0．01)，而新生淋巴管 与PMN间呈显著性负相关(r=-0．199，P0．01)。 结论角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管和新生血管、炎症指数问存在着密切地关联。 第三部分VEGF-C在大鼠角膜碱烧伤后角膜中的表达 目的探讨角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管形成的分子机理。 方法制备大鼠角膜碱烧伤模型，免疫组化染色检测烧伤后第1、3、5、7，9、 11、t4d时角膜组织VEGF-C的蛋自表达，实时定量荧光PCR(real-tiraePCR)技术 观测各时间段的碱烧伤角膜中VEGF-C mRNA的变化。 结果免疫组化法提示正常角膜中无VEGF．C阳性蛋白表达，碱烧伤后ld时角 膜中出现了VEGF-C阳性蛋白，3d时达到高峰，zW末时消失。Real-tiraePCR显 示正常大鼠角膜组织中有少量的VEGF-C mRNA表达。VEGF-C mRNA值为52440．2 +2600(拷贝数