甲状腺癌相关基因的研究-内科学专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特另J3Jtl以标注和致谢的地方 外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获 得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的 同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确说明。 作者签名： 日期： 年 月 日 关于学位论文使用授权说明 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的 全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其他手段保存学位论文；学校 可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。 作者签名： 导师签名： 日期： 年 月 日 中南大学 中南大学 同等学历博士学位论文 甲状腺癌相关基因的研究 中中 文文 摘手葡 要斐 5 5 第一部分 甲状腺癌P 3基因mRNA、P 3基因蛋白表达 目的：研究甲状腺癌P”基因mRNA、P”基因蛋白表达。 5 方法：应用原位杂交法和逆转录聚合酶链法观察了甲状腺癌P 3基 因mRNA的表达。运用免疫组织化学方法检测了甲状腺癌P”基因蛋白的 表达。 结果：①甲状腺肿瘤及瘤旁组织均有P”基因mRNA的表达，但甲状 5 腺肿瘤P 3基因mRNA表达明显强于瘤旁组织。 ②甲状腺癌组织P”基因mRNA表达明显强于良性甲状腺瘤。 5 ③甲状腺癌组织P 3基因蛋白的表达明显强于良性甲状腺瘤。 5 5 结论：甲状腺癌P 3基因mRNA、P 3基因蛋白超表达 5 关键词： 甲状腺癌；P 3基因； 表达 中南大学 中南大学 同等学历博士学位论文 5 第二部分 甲状腺癌P 3基因k-ras基因序列分析 5 目的：检测甲状腺癌P 3基因外显子7，8，k-ras基因外显子1、2 突变情况。 方法：采用聚合酶链式反应一测序方法对14例甲状腺癌标本进行序 列分析。 5 结果：14例甲状腺癌中有2例P 3基因外显子7发生突变，有3例 k-ras基因外显子2发生突变。 5 结论：甲状腺癌存在P 3基因及k-ras基因的突变。这对研究甲状 腺癌的发病机理可能有着积极的意义。 5 关键词：甲状腺癌；P 3基因； k-ras基因； 测序； 突变 5 第三部分 甲状腺癌P 3基因甲基化状态分析 5 目的：探讨甲状腺癌P 3基因甲基化状态。 方法：应用限制性内切酶HpaII和Msp I酶切甲状腺癌及癌旁组织 DNA，通过聚合酶链反应扩增P”基因第5外显子，经琼脂糖凝胶电泳后， 分析其电泳图谱。 结果：12例甲状腺癌中9例P”基因第5外显子出现高甲基化状态， 而5例癌旁组织为低甲基化状态。 5 结论：P”基因高甲基化状态可能与P 3基因突变有关。 关键词：甲状腺癌；P”基因； 甲基化 中南大学 中南大学 同等学历博士学位论文 第四部分 甲状腺癌差异表达基因的筛选与克隆 目的： 筛选、克隆在甲状腺癌组织与正常甲状腺组织之间差异表 达的、可能对甲状腺癌的发生发展起作用的相关基因。 方法： (1)应用抑制性消减杂交(SSH)的方法构建人甲状腺癌组 织与正常甲状腺组织之间差异表达的cDNA消减文库，(2)克隆、鉴定 甲状腺癌组织特异性差异表达的基因片段，通过生物信息学方法进行初 步分析，(3)设计基因特异性引物，用5’端和3’端cDNA末端快速扩 增法(RACE)进行全长基因序列扩增，(4)以RNA印迹实验(Northern Blot) 验证30号序列在两种组织中的表达差异。 结果： 成功构建了具有高消减效率的人甲状腺癌cDNA消减文库 (包括正向和反向两个文库)，对其中阳性克隆的插入cDNA片段进行测 序，经Blastn程序检索Genbank表明，反向SSH产物中有4个片段为未 知新序列，它们与人类已知基因的同源匹配率在44％一83％，提示它们 可能来自于在甲状腺癌中特异性低表达的新基因。这4个可能代表新基 因的EST被NCBI的6enbank数据库收录，为从分子生物学水平探讨甲状 腺癌的发生、发展机制提供了新的突破口。通过RACE的方法已经获得 TCRS30号序列的cDNA全长，其全长序列正在进行测定中。正向SSH得 到了3个在甲状腺癌中高表达的cDNA片段，其中一个片段有3个相同的 拷贝。经同源性分析，结果表明这些片段与来自恶性肿瘤的相关基因片 段具有很高的同源性，提示它们所代表的基因可能在多种组织来源的恶 中南大学 中南大学 同等学历博士学位论文 性肿瘤发生过程中起作用。通过Northem Blot初步验证了30号序列在两 种组织中的表达差异。 结论： l、人甲状腺癌eDNA消减文库的建立，为筛选和鉴定特异性 甲状腺癌抑制基因及其全长克隆、