甲癣洗剂治疗全甲营养不良型甲真菌病的实验研究及临床观察-中医外科学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 引 言 甲癣洗剂(外洗五号)是青岛市海慈医疗集团中医院临床应用多年的院内协定处 方，是皮肤科治疗真菌病的常用处方之一，临床应用 10 余年，疗效确切。该洗剂亦 可用于治疗甲营养不良、淤积性皮炎、萎缩及与代谢性疾病、末梢循环障碍有关的甲 改变。本课题对甲真菌病中全甲营养不良型（total dystrophic onychomycosis，TDO） 进行研究探讨。 甲真菌病是皮肤科的一种常见病和多发病，约占皮肤真菌感染的 30%，占自然人 群发病率的 2%～5%。近年来研究认为甲真菌病是由皮肤癣菌、酵母菌及其它丝状真 菌侵犯甲板或甲下组织引起的疾病。经研究资料[1] [2]表明，引起甲癣的病原中，皮肤 癣菌约占 62.8%(其中红色毛癣菌占 57.6%、石膏样毛癣菌约占 41.2%)，酵母菌约占 31.2%(其中白色念珠菌占 70%)，非皮肤癣菌霉菌约占 6%。临床上甲真菌病分为 4 型 [3]：远端侧位甲下甲真菌病(DLSO)，白色表浅甲真菌病(SWO)，近端甲下型(PSO)和全 甲营养不良型(TDO)。临床上全甲营养不良型甲真菌在甲真菌病中的发病率有逐年增 加的趋势且危害比较严重，好发于中老年患者，其中多数患者伴有内科疾患，如高血 压、糖尿病、高脂血症等，导致四肢末端血液循环不良，营养障碍，甲板及甲周损毁 较重，甲周微循环的障碍，使药物难以直达病所，故 TDO 型在临床上治疗是比较棘手 的。根据郑岳臣等[4]观察，疗效欠理想且容易复发的有：新甲生长慢者；拇指或拇趾 甲受损特别是嵌甲者；伴糖尿病或手足多汗或雷诺现象者；甲损害表现为 PSO 或 TDO 者等。因此，临床上如何改善甲周微循环、加快甲生长速度、缩短疗程，提高全甲营 养不良型甲真菌病患者的治愈率，是目前医学治疗难点。临床迫切需要一种既能协同 抗真菌药物的抗真菌作用、又具有改善甲周循环障碍、促进甲生长的治疗药物。本课 题旨在从实验和临床两方面研究甲癣洗剂的抗真菌作用、对甲的生长速度的影响及其 临床治疗效果。为全甲营养不良型甲真菌病的临床治疗提供一定的指导作用，进一步 探讨中药治疗全甲营养不良型甲真菌病的理论机理。 实验研究 甲癣洗剂对甲真菌病常见致病菌的药物敏感性实验 1 实验材料 1.1 药 物：11 种中药为射干、紫草、黄连、蛇床子、地肤子、丁香、川椒、花椒、 葱白根、生姜、大蒜，均购自青岛市海慈医疗集团中药房。 甲癣洗剂方药组成： 丁香 10g 川椒 25g 辣椒 10g 蛇床子 30g 黄连 20g 紫草 20g 射干 30g 地肤子 30g 生姜 50g 大蒜 30g 葱白根 25g 1.2 菌 种：3 个菌种为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、白色念珠菌，均由山东省齐鲁医院 皮肤科提供。 1.3 试剂仪器 蒸馏水、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、15mL 试管及管塞、90ml 平板培养皿、微量加 样器及吸头、数显式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）、超净工作台、接种环 及接种棒、显微镜、血细胞计数板、HYQ 改良型 RPMI1640 培养液（北京海克隆生物 化学制品有限公司）、微量天平、漏斗、高压消毒锅、5mL 注射器等。 2 实验方法 2.1 菌悬液制备 将冷藏菌株室温下放置一夜，将受试菌株在培养基上活化 2 次，以保证其纯度和 活力。皮肤癣菌需在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上 37℃培养 14 天；白色念珠菌 在葡萄糖蛋白胨琼脂培养基(SDA)上 25℃培养 48 小时。皮肤癣菌菌悬液配制：以小 独白金耳由琼脂板上刮取一个白金耳的菌落加至 RPMI1640 培养液中（5ml)，加入组 织研磨器中研磨，所得菌悬液用 15～20um 孔径的无菌滤器过滤，然后以灭菌生理盐 水稀释至 1：100 的菌液浓度，再以血细胞计数板测定总量，即将上述菌液滴入血细 胞计数板上，测定 16 大格内的真菌孢子数，再除以 16 即为每 mm2 菌数，再乘以 5（即 为菌数/mm3），继乘 1000，又乘 100（稀释倍数），即为菌数/ml，按此量以灭菌生理 盐水调节菌数达 0.5～2.5×105cfu/ml。白色念珠菌菌悬液配制：以小独白金耳由琼 脂板上刮取一个白金耳的菌落加至 RPMI1640 培养液中（5ml)，混匀后校正浊度至 0.5 麦氏浊度，使每 ml 菌量相当于 0.5～2.5×105cfu/ml，然后用血细胞计数板调整菌量 至 5×105cfu/ml。 2.2 药样制备 每种中药称取 50g，加水 200～300ml，浸泡 30min，开锅后改文火煎煮 15 min， 用纱布滤出滤液；药渣再加 200～300ml 水，待开锅后改文火煎煮 20 min，用纱布滤 出滤液。将两遍熬出的药汁兑在一起，加热浓缩为 50