甲状腺功能减退大鼠大脑皮质氧化应激及神经元型一氧化氮合酶神经元的变化及意义-内科学专业论文.docxVIP

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河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 研究生签名.囊】产玲师 咎院领导签名: 多月1多日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名旁Il穆吟导师签 I l 石日 甲状腺功能减退大鼠大脑皮质氧化应激及神经元型 甲状腺功能减退大鼠大脑皮质氧化应激及神经元型 一氧化氮合酶神经元的变化及意义 摘 要 目的:研究药物性甲状腺功能减退大鼠大脑皮质氧化应 激及神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase, nNOS)神经元的变化及意义,探讨其参与甲状腺功能减退脑 损害的可能作用。 方法:Sprague.Dawley(SD)雄性大鼠42只,体重1 80- 220 g,随机分为对照组18只和甲状腺功能减退组(甲减组) 24只。甲减组给予丙基硫氧嘧(Propylthiouracil,PTU)连 续灌胃制备甲减动物模型。将丙基硫氧嘧啶溶于蒸馏水中, 甲减组大鼠每天按每100 g体重给予20 mg丙基硫氧嘧啶, 计算相应的剂量。对照组每日给予等量的生理盐水灌胃。所 有动物饲以普通饲料,自由饮水和进食。每周定时称量体重 一次,调整丙基硫氧嘧啶剂量。分别于25天、45天、60天 宰杀大鼠。宰杀前用三等分Y型迷宫测定大鼠学习能力。宰 杀时股动脉取血5 ml,2000 r·min。1离心10 min,取血清置于 .20℃冰箱保存,待测血甲功三项(FT3、FT4、U.TSH)。开 颅取出脑组织,用冷生理盐水冲洗脑组织3次,去除血污,用 冰浴PH=7.40的磷酸盐缓冲溶液(PBS)按10:1比例配制成 10%脑组织匀浆液,然后将混悬液移入离心管,以4000 r/min 离心1 5 rain,取上清液,.70。C冻存,待测大脑皮质谷胱甘肽过 氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH.Px)、超氧化物歧化 酶(Superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde, 中文摘要MDA)、一氧化氮(Nitric 中文摘要 MDA)、一氧化氮(Nitric oxide,NO)的活性;同时对大脑 皮质用4%中性多聚甲醛液固定,常规石蜡包埋、切片,用免 疫组织化学SABC结合计算机图像分析技术,动态观测甲减 大鼠大脑皮质nNOS阳性神经元平均截面积和灰度值的变 化。 结果:①两组大鼠一般情况比较:对照组大鼠体质量增 加较快,摄食饮水量多,反应灵敏,活动性强,毛发有光泽, 声音清亮:甲减组大鼠体质量增加慢,摄食饮水量较少,反应 迟钝,行动迟缓,毛发稀疏无光泽,声音嘶哑。且随着甲减 病程进展,甲减大鼠体重逐渐减轻。②对照组与甲减组大鼠 学习能力的比较:甲减组较对照组所需电击次数明显增多(尸 O.05),学习能力下降。③两组大鼠甲状腺功能的比较:25 天甲减组大鼠血FT3、FT4水平较对照组显著降低(KO.05), U—TSH水平较对照组显著升高(P0.05),表明甲状腺功能 减退大鼠造模成功;45天及60天甲减组大鼠血FT3、FT4水平 较同期对照组显著降低(PO.01),U.TSH水平较对照组显 著升高(P0.01)。④对照组与甲减组大鼠大脑皮质氧化应激 指标的比较:25天甲减组大鼠大脑皮质GSH.Px、SOD的活性 较同期对照组降低(尸O.05),45天、60天甲减组大鼠大脑 皮质GSH.Px、SOD的活性较同期对照组降低(PO.01)。且 随甲减病程进展,呈进行性降低。25天甲减组大鼠MDA、 NO活性较同期对照组明显升高(尸O.05),45天、60天甲减 组大鼠MDA、NO活性对同期对照组明显升高(尸0.01)。 随甲减病程进展,MDA、NO活性呈进行性升高。⑤光镜及 计算机图像分析观察结果:nNOS阳性神经元在大脑皮质散 在分布,多呈圆形、卵圆形、梭形和三角形:胞体较大,突 中文摘要起明显,免疫组化染色使胞质和突起呈棕褐色,胞核不着色: 中文摘要 起明显,免疫组化染色使胞质和突起呈棕褐色,胞核不着色: 25天甲减组nNOS阳性神经元较对照组染色程度加深,灰度 值较对照组下降,有统计学意义(尸O.05),且45

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