间充质干细胞生物学特性研究及肌腱损伤和肌肉损伤动物 模型的构建-体育学专业论文.docxVIP

间充质干细胞生物学特性研究及肌腱损伤和肌肉损伤动物 模型的构建-体育学专业论文.docx

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万方数据 万方数据 学术诚信声明 兹呈交的学位论文,是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取 得的研究成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其 他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。本人依法享有和承担由此 论文产生的权利和责任。 声明人(签名): 时 间: 保护知识产权声明 本人完全了解集美大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校 有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意集美大学可以 用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 作 者(签名): 导 师(签名): 时 间: 间充质干细胞生物学特性研究及肌腱损伤和肌肉损伤动物 模型的构建 摘 要 肌腱损伤和肌肉损伤是体育运动中常见的运动性疾病,影响运动员机能水平和运动能 力的发挥,成为临床医学和运动医学的主要研究问题。干细胞在个体生长发育和病理组织 再生修复中具有重要作用。干细胞发现及其生物学特性的研究为肌腱和肌肉生理、病理机 制的研究提供了基础,同时为干细胞促进损伤的修复提供实验基础。本研究主要建立了肌 腱干细胞和肌肉卫星细胞体外扩增培养体系,研究其生物学特性,建立肌腱损伤和肌肉损 伤小鼠动物模型,研究干细胞在运动性损伤修复中的作用,得到以下结果: 1.采用 I 型胶原酶消化分离胎牛和仔猪跟腱来源肌腱干细胞,分离后的细胞在体外培 养条件下分别传代至 43 代和 11 代;分别通过 RT-PCR 和免疫组织化学检测法对两个物种 来源的肌腱干细胞进行特异性标记物鉴定;免疫组织化学检测结果显示,细胞对 Collagen Ⅰ、CollagenⅢ、CD105、CD44、Tenascin-C,Tnmd、nucleostemin 等均表达阳性;RT-PCR 结果显示,不同传代次数的细胞均表达 CollagenⅠ和 CollagenⅢ,不表达 CollagenⅡ,表 明所分离的细胞为肌腱干细胞;对分离的细胞进行生物学特性鉴定;在体外通过不同诱导 液,将肌腱干细胞分别诱导成成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞,RT-PCR 检测到软骨细胞 特异性基因均阳性表达; 2.采用 I 型胶原酶和胰酶联合消化法消化仔猪胫骨前肌肌肉组织,分离的细胞接种后 通过差速培养法纯化并培养至 12 代,通过 RT-PCR 和免疫组织化学检测鉴定细胞均表达 Myod,Moygenin,Pax7,c-Met,PCNA 和 Nanog,对分离纯化后的细胞进行生物学特性 和多分化潜能研究。 3.采用心脏毒素(CTX)构建小鼠肌肉损伤模型,石蜡病理切片显示肌肉正常组织被 破坏,血清学检测肌肉中肌酸激酶(CK)含量明显超出正常范围,对肌肉卫星细胞进行细 胞示踪剂(CM-Dil)标记后移植到损伤部位,组织学和血清学结果显示肌肉损伤有所恢复; 通过 I 型胶原酶诱导的小鼠肌腱损伤制备小鼠肌腱损伤模型,石蜡切片显示肌腱胶原排列 紊乱,肌腱基质严重破坏,对肌腱干细胞用 CM-Dil 标记,将标记后的细胞注射到小鼠肌 腱损伤位点,观察组织学和血清学相关指标,结果显示细胞移植治疗组损伤肌腱有良好修 复; 综上所述,本文介绍了肌腱损伤、肌肉损伤和干细胞研究进展,在体外成功分离、培 养了胎牛、仔猪跟腱来源 TDSCs 和仔猪肌肉卫星细胞,并对其生物学特性和多分化潜能进 I 行了研究;通过干细胞体外移植治疗,损伤的小鼠肌腱和肌肉组织得到恢复,初步为以干 细胞为基础的细胞疗法治疗损伤、促进组织再生修复提供实验依据。 关键词:肌腱干细胞;肌肉卫星细胞;分离培养;多分化潜能;动物模型;肌腱损伤;肌 肉损伤;细胞治疗 II Research of Biological Characteristics of Mesenchymal Stem Cells and the Construction of Tendon Injuries and Muscle Injuries in Animal Model Abstract As common diseases in sports and daily life, tendon injury and muscle injury have high incidence and poor healing rates, affecting people’s normal life, especially body function and sports potential of athletes. Stem cells play significant role not only in individual development, but also in repairment of patholog

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