碱蓬SsMBTF基因克隆及功能分析-作物专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人声明，所呈交的学位论文，是受旱生植物耐旱功能基因分析及应用项目资 助，在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所 知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发 表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证 书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的 说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的 责任。 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 论文使用授权的说明 本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送 交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容， 可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。□ 不保密, 本学位论文属于不保密。 □ （请在方框内打“√”） 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 指导教师亲笔签名： 日 期： 摘要 摘要 I万方数据 I 万方数据 摘要 干旱和盐碱是造成农业减产的主要原因，从盐生植物中克隆耐旱耐盐基因有 助于培育具有耐旱耐盐特性的植物新品种。 本研究的目的是利用 RT-PCR 技术从盐生植物碱蓬中克隆 SsMBTF 基因，并对 其功能进行研究。 研究结果表明，SsMBTF 基因开放性可读框全长 399bp，不含有内含子结构， 编码一个包含 132 个氨基酸的蛋白，分子量为 15544.9Da，等电点为 10.14。该蛋 白是一种 MEF2 型的 MADS-box 转录因子，定位于细胞核中。 定量分析结果表明 SsMBTF 基因在根、茎、叶中均有表达，在根中表达相对 较少，在叶中的表达量最多。在 24 h 内 SsMBTF 基因表达呈现由低到高再下降的 节律变化，SsMBTF 基因受 PEG 诱导高表达，略受盐、冷、热等胁迫诱导表达， 而对 ABA 不敏感，说明 SsMBTF 基因表达具有渗透胁迫专一性的，而且不依赖于 ABA 信号调控途径。 SsMBTF 异源表达获得大肠杆菌重组子，在高盐、高渗条件下重组子生长快于 对照（含空载体大肠杆菌），说明 SsMBTF 在高盐、高渗下保护重组子免遭生长抑 制起作用。 构建了 pCAMBIA1300-MBTF 过表达载体，转化农杆菌，侵染拟南芥植株， 获得了 T1 代种子。 关键词：碱蓬，SsMBTF 基因，MADS-box 转录因子，定量表达分析，原核表达 Ab Abstract Abstract Drought and salinity are major factors causing the decrease in agricultural production. Cloning of drought and salt- tolerant genes from halophytes will facilitate breeding of new plant varieties with drought and salt tolerant traits. The goal of this study was to clone SsMBTF from Suaeda salsa.and then to analyze its function. The results showed that open reading frame of SsMBTF was 399bp in length, which had no introns and encoded 132 amino acids. The putative Mr and pI of SsMBTF were 15544.9 Da and 10.14, respectively. SsMBTF was a MEF2 type MADS-box transcription factor which was located in the nucleus. Q-PCR analysis showed that SsMBTF could be expressed in root, stem and leaf. Amount of SsMBTF expression was most in leaf and relatively lower in root. Expression of SsMBTF displayed clock rhythm changes which were from low to high and then degressive within 24 h. SsMBTF was highly expressed by induce