鉴定直肠癌异常表达的miRNAs及其与恶性演进的关系-外科学专业论文.docxVIP

1111 1111 1 1 Il ll II I I Ill II IIl Y1 91 8297 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名：丛日期．型年j上日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 作者躲趁导师签名叠眺丛年』月丝日 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 摘 要 结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)是我国最常见的癌症之一， 结直肠癌筛查与早期诊断是降低疾病死亡率的关键，因此，寻找结直 肠癌癌变相关的生物标志物(Biomarker)具有重要的临床意义。越来 越多的证据表明微小RNA(microRNA，miRNA)异常表达与癌变密切相 关，miRNA可能是一类重要的肿瘤生物标志物；miRNA是在真核生物 中发现的一类小分子非编码RNA，约由22-25个核苷酸组成。它在细 胞分化、细胞周期与细胞凋亡的调控、癌变等多个方面起重要的作用。 miRNA通过5 7端第2～8核苷酸与mRNA3 7端非翻译区部分序列的结 合，促使靶mRNA的降解和翻译抑制。miRNA起着类似转录因子的功 能，调控靶基因的表达。miRNA异常表达是癌变过程中的关键因素之 一。鉴定肿瘤异常表达的miRNA将增进我们对癌变分子机理的理解， 同时，也可为癌症筛查、早期诊断与预后提供非常有用的分子标志物。 已有一些研究表明：在结直肠癌中miRNA也呈现异常下调或上调 表达。采用实时RT-PCR方法鉴定了13个在结直肠癌组织中异常表达 的miRNA；采用包含287个miRNA的芯片分析结直肠癌与直肠癌细胞 系的miRNA表达谱，确定了37个与正常组织表达有明显差异的miRNA； 采用包含455个miRNA的基因芯片发现了21个miRNA在结直肠癌组 织中异常表达。据估计，人存在大约i000个miRNA，在结直肠癌中， 已有的研究报告分别筛选了96、145、287及455个miRNA的异常表 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 达，因此，完全有必要系统地鉴定在结直肠癌中异常表达的miRNA。 近年来的研究表明：结直肠癌应被视为一种“复杂的”、异质性 疾病。结直肠癌发生在近端和远端表现出不同的生物学与临床特征。 检测发现10多个肿瘤相关标志物在近端和远端发生的结直肠癌间呈 现明显的差异。同样，根据肿瘤微卫星不稳定来区分右侧结肠癌与直 肠癌； E-cadherin表达差异来区分左侧结肠癌和直肠癌。连同在胚 胎发育过程中整个结直肠不同区域起源和基因表达谱差异方面的证 据，显示结直肠癌是包含不同疾病的“复杂病。已有的研究混合了 结肠癌与直肠癌样本，同时，没有区分不同的病理分期，因此，采用 基因芯片分析就造成许多本来异常表达的miRNA被忽略。 为解决以上这些问题，我们使用包含了904个miRNA的新一代基 因芯片(已接近人类所有的miRNA)来确定直肠癌和非瘤组织中差异表 达的miRNA。6例配对直肠癌病理TNM分期为ⅡI期、Ⅳ期或Dukes分 期为“C”、“D”期，增加了鉴定在直肠癌中异常表达miRNA的灵敏性。 直肠癌组织miRNA的基因表达谱 我们采用miRCURYw Array LNA microRNA chip(v．14．0)基因芯 片比较直肠癌组织和邻近非肿瘤组织之间miRNA表达差异。 结果发 现两者之间mi RNA表达谱存在着显著不同，当设定平均上升倍数大于 2倍和P值小于0．05为标准，发现了直肠癌组织中有88个miRNAs II 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 呈显著上调表达和40个miRNAs呈显著下调表达。将我们的结果与文 献报道在结直肠癌(CRC)中异常表达的miRNAs比较，结果发现，在 88个上调表达的miRNAs中，47个己证实在结直肠癌组织中异常表达。 在40个下调表达的miRNAs中，15个miRNAs已报道在结直肠癌组织 中异常表达。我们在直肠癌组织中新发现了66个miRNAs异常表达。 R T—qPCR分析异常表达的miRNAs 选取上调或下调差异相对高的12个miRNAs，