降钙素基因相关肽基因导入糖尿病大鼠阴茎海绵体及其对勃起功能的作用-泌尿外科专业论文.docxVIP

结果，Z球删灰|量分衍所抽提得总I悄AOD260，oD280-1．84971．8，1．5％琼脂糖 结果 ，Z球删灰|量分衍所抽提得总I悄AOD260，oD280-1．84971．8，1．5％琼脂糖 凝胶电泳可见28S和18S两条清晰条带； (2)RT-PCR卢勿鬯苏分衍扩增产物行l％琼脂糖凝胶电泳后可见一条特异的片 段，和rCGRPcDNA大小相吻合。 偿，重绥右蘑笙定①PCP,鉴定PCR产物行1％琼脂糖凝胶电泳后可见～条特异 的片段，和rCGRPcDNA大小相吻合；②酶切鉴定抽提质粒经双酶切，酶切产 物行1％琼脂糖凝胶电泳后在凝胶成像仪下可见两特异性条带，分别和 I：)cDNA3．1(+)和rCGRPcDNA大小相吻合；③DNA测序测序结果经BLAST 分析，与rCGRP基因编码区全长序列完全一致。 结论 (1)大鼠脑组织中有rCGRP的表达； (2)通过RT-PCR及基因重组技术成功构建重组表达质粒pcDNA3．I(+)／rCGRP。 关键词 降钙素基因相关肽；pcDNA3．1；DNA重组 第二部分 糖尿病大鼠模型的建立及勃起功能测定 目 的 建立勃起功能显著低于正常水平的糖尿病①M)大鼠模型，为进一步行糖尿 病性勃起功能障碍(DMED)的CGRP转基因治疗提供理想的动物模型。 方法 150只lO周龄sD雄性大鼠，体重200·2509，随机分成对照组(n=12)和实 2 验组心=138)。实验组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液60 验组心=138)。实验组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液60 mg／kg，对照组腹 腔注射相应剂量的O．IM pH4．5枸椽酸钠溶液。注射后3d，于尾静脉采血测血 糖，后每2wk测血糖1次。实验期间按照DM判断标准判断每只大鼠DM模 型成功与否。STZ注射后10wk，从DM模型制作成功的大鼠中随机选取12只， 测定阴茎组织的rCGRPmRNA、CGRP表达及阴茎的基础阴茎内压(tce)和神经 刺激诱导ICP，并和正常对照组比较。 结果 御_旋劳况STZ注射后第5、7、8wk各有1只大鼠死亡。4只大鼠于第8、10wk 血糖未达糖尿病标准，糖尿病表现不明显，判为STZ抵抗。138只大鼠中DM 模型制作成功131只定为DM组，成功率94．9％。 纪伍劳．触重DM组STZ注射后各时间点的血糖水平均显著高于对照组 口0．001)；STZ注射前DM组和对照组的体重无显著性差异俨o．05)，而注射 后10wk DM组的体重显著低于对照组∞0．001)，平均体重较对照组低30．4％。 例rCC,11PmlINA和CGRP辱房缈袭送STZ注射后10wk，DM组rCGRPmRNA和 CGRP的相对量分别为0．49-1-0．23和0．030_+0．011，分别显著低于对照组的O．88 士0．27和0．064士O．022 CO．001)。 商J雳瀣天窟闻ICP毖裁STZ注射后10wk，DM组的基础ICP和神经刺激诱导 ICP分别为8．7+3．4和54．6=1=17．5cmi-120，分别显著低于对照组的36．8-=l：11．2和 156．3士38．4 emH20(尸o．00D，DM组的基础ICP和神经刺激诱导ICP较对照组 分别低76．4％和65．1％。 结论 以srz60mg／kg腹腔注射建立DM大鼠模型操作方便、成功率高，而且所 制作的DM大鼠模型阴茎的基础ICP和神经刺激诱导ICP均显著低于正常大 鼠，能成为理想的DMED研究的动物模型。 关键词 糖尿病；血糖；勃起功能障碍 第三部分 第三部分 CGRP基因导入阴茎海绵体后的表达 及对糖尿病大鼠勃起功能的影响 目 的 通过重组真核表达质粒peDNA3．1(+)，疋GRP，将rCGRP基因导入DM大 鼠阴茎海绵体组织，研究rCGRP基因导入后不同时间点在阴茎组织中的表达 及对勃起功能的作用。 方法 SD雄性DM大鼠119只随机分成3组；pcDNA3．I／rCGRP处理组(A组)、 pcDNA3．I空质粒对照组(B组)’PBS空白对照组(C组)。A组每只大鼠阴茎海 绵体注射含pcDNA3．1(+)／rCGRP2001．tg的20％蔗糖PBS液，B，C组分别注射 相当量的pcDNA3．1空质粒和20％蔗糖PBS。分别予注射后l、3、7和14d， 每组随机选取9．10只大鼠在麻醉下进行基础和神经刺激诱导ICP测定，然后 处死大鼠，从根部切除完整的阴茎组织，分别用RT-PCR和Western Blot法半 定量阴茎组织中CGRPmRNA和CGRP含量。 结果 (1)CGRPmRNA蓑送赤乎注射后ld、3d、7d、14d，A组CGRPmRNA相对量均 显著高于B、C组(P0。01．o．oot)，丽B、C组间均无显著性差异妒0．05)；A、 B、C组内ld、3d、7