酵母基因芯片的制备及其在热休克基因表达谱研究中的应用-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

英文缩写词表英文缩写 英文缩写词表 英文缩写 英文全称 中文全称 Amp7 ampieillin resistant 氨苄青霉素抗性 ATP adenosine triphosphate 腺苷三磷酸 CTAB hexadecyltrimethyl m-nmonium十六烷基甲基溴化钕 bromide CDNA complementary deoxyribonucleic acid互补DNA DEPC diethylpyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 dNTP deoxyribonucleoside triphosphatc 脱氧三磷酸核苷 EB ethidium bromide 溴化乙锭 ED’I：A ethylene dinitrilotetra．acetic acid 乙二胺四乙酸 IPTG isopropyl-B．D-thiogalactoside 异丙基·B-D·半乳糖苷 rnRNA messenger RNA 信使RNA OD optical density 光密度 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR Polymemse chain reaction 聚合酶链反应 RD—PCR restriction display PCR 限制性显示PCR RNase Ribonuclease RNA酶 rpm revolutions per minute 每分钟转数 SDS sodium dodecyl sulphate 十二烷基硫酸钠 TE^d匣D N，N，N’，N’-tetramethylethylenediamin N，N，N’’N’-四甲基乙二 e 胺 Iris N-trisOaydroxymethl)aminomethane N一三羟甲基氨基甲烷 X·gal 5．Bromo-4．Chloro．3．indolyl 5-溴-4．氯-3．吲哚-13-硫 ．B．D．Galactoside 代半乳糖苷 YPD Yeast extract／peptone／dextrose 酵母提取物／蛋白胨，葡 萄糖(酵母培养基) 摘 摘 要 ／在所有的真核生物中，人们对酿酒酵母(Saccharomyces cerevJsiae) 分子遗传学方面的认识最早，最先完成的真核生物基因组序列测定也是 酿酒酵母的基因组序列。接下来的工作就是阐明酵母的基因表达模式及 其基因产物的功能。为了使这项工作进行得更加顺利，必须寻找一种既 系统又全面的方法，来解释酵母细胞中基因表达的模式和产物的功能以 及产物之间的相互作用。J 本研究利用RD--PCR(Restriction Display．PCI己’RD—PcR)技术， 从酵母细胞中分离出大量cDNA片段，克隆和构建了cDNA片段文库， 迸一步将单基因片段纯化出来，建立了相应的数据库对所有信息进行管 理。经纯化的cDNA片段作为基因芯片的探针。采用Cartesian基因芯片 打印仪，将纯化的cDNA片段打印在CORN】NG玻片表面，制作了酵母 细胞基因表达谱芯片。最后提取热休克前后酵母细胞的总RNA，经逆转 录标记合成cDNA后与酵母基因表达谱芯片杂交，初步研究了酵母细胞 在热应激时基因表达的变化。 综上所述，本研究采用RD--PCR技术，探索了利用该技术快速分 离大量cDNA片段的具体过程，并建立了酵母cDNA文库及酵母cDNA 探针文库，为DNA芯片的制备打好基础。(然后利用基因芯片信息量大、 快速、敏感等特点，对热休克后的酵母基因表达的改变进行了初步的研 究，对于全面认识热休克以及热休克引起的细胞内部变化机制具有重要 意义文 关键词：酵母?RD—PCR技术、基因表达!基因芯片?热休克， 2 ABSTRACTSaccharomyces ABSTRACT Saccharomyces cerevisiae(S．cerevisiae)is the one ot the first and well characterized eukaryotic organisms whose complete genome was sequenced．n坞next chanllenge is to elucidate its gene expression paRem and the functional mechanisms of the gene products．In order to meet this challenge，systematic and comprehensive technology needs to be developed to explore changes of gene expression profile，the functions