结核患者DC亚群的变化和结核杆菌抗原对DC成熟及调节γδT细胞功能的影响-免疫学专业论文.docxVIP

目 录 1．中文摘要?????????????????????????? 1 2．英文摘要?????????????????????????? 5 3．论文正文 引言???????????????????????????? 10 材料与方法????????????????????????? 12 结果???????????????????????????? 19 讨论???????????????????????????? 32 4．结论???????????????????????????? 38 5．参考文献?????????????????????????? 39 6．致谢???????????????????????????? 43 7．附录 附录 A 英中文术语缩略语对照表?????????????? 44 附录 B 常用试剂配制 ???????????????????? 46 附录 C 个人简历??????????????????????? 48 附录 D 已发表的论文???????????????????? 48 附录 E 综述??????????????????????? 49 附录 F DC 亚群检测所用血样情况一览表????????????? 59 PAGE PAGE 1 结核患者 DC 亚群的变化和结核杆菌抗原对 DC 成熟及调节 γδ T 细胞功能的影响? 中 文 摘 要 研究背景：已有的研究证明，人体内树突状细胞（dendritic cell，DC）在许多疾 病包括肺结核病中都有不同程度的改变，在不同分期肺结核患者体内 DC 亚群也 呈现不同的变化，这些变化是否与肺结核患者体内 γδ T 细胞 Vδ2%低表达有相关 性还不得知。已有的研究报导结核杆菌对 DC 功能有抑制作用，从结核杆菌 H37Ra 株提取的结核杆菌耐热性多肽抗原（MtbH-Ag）是一种能优势诱导 γδ T 细胞活化 的小分子多肽；结核杆菌 H37Ra 菌体超声蛋白是成分复杂的粗抗原，既包括细菌 本身的结构蛋白质例如细菌的表面抗原，又包括细菌的胞浆抗原；分泌蛋白抗原 是结核杆菌 H37Ra 株分泌性蛋白质，由细菌在生长期间释放到细菌培养液中的抗 原。这三种抗原分别对 DC 的成熟和功能及对 γδ T 细胞功能的调节有何作用却不 清楚，负载 MtbHAg 后的 DC 与体外诱导的自体 γδ T 细胞共培养后对后者分泌 IL-17 和 IFN-γ 的影响也未见报道。 目的：（1）观察 PTB 与 HD 和其他疾病间 DC 亚群即髓样树突状细胞（myeloid dendritic cells，mDC)和淋巴样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cells，pDC)的 变化及与 γδ T 细胞 Vδ2%低表达（60%）的相关性； （2）观察 MtbH-Ag、菌体超声蛋白抗原及分泌蛋白抗原对 DC 成熟性分化和对 γδ T 细胞功能调节的影响； （3）观察 MtbHA-Ag 诱导成熟的 DC 对自体 γδ T 细胞分泌 IL-17 和 IFN-γ 的影响。 方法：（1）采集 36 例健康者（HD)、138 例肺结核患者、39 例矽肺患者和 18 例 间日疟患者外周静脉抗凝全血，用四色荧光抗体染色后在流式细胞仪检测和分析 DC 亚群即 mDC(Lin-HLA-DR+CD11c+)和 pDC(Lin-HLA-DR+CD123+)，根据病程进 展又将肺结核患者分为初治组和复治组。 （2）用健康成人外周血分离单核细胞，并在细胞因子 GM-CSF、IL-4 的作用下获 得未成熟 DC(immature DC，imDC)； ?本文研究受国家科技重大专项基金课题（2008Z资助 （3）用 MtbH-Ag、菌体超声蛋白抗原及分泌蛋白抗原分别诱导 imDC 继续分化， 采用流式细胞术分析不同处理的 DC 表面成熟性相关分子 CD83、CD86、HLA-DR， 非特异性成熟分子 CD69，树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3 结合非整合素因 子（DC-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin，DC-SIGN ）的变化； （4）分离健康成人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC)， 分别在 IL-2、MtbH-Ag 和或 IL-23、IL-1β和 TGF-β的作用下体外诱导培养富含 效应性 γδ T 细胞的 MtbH-Ag 激活的 T 细胞（Mtb-AT)或富含分泌 IL-17 的 γδ T 细 胞的 MtbH-Ag 激活的 T 细胞。 （5）上述不同抗原诱导后的 DC 与自体体外